牛血清,細胞技術,實驗,生物秀

　　實驗目的

　　了解新生牛血清在細胞培養中的作用，掌握血清篩選技術。

　　實驗原理

　　牛血清是細胞培養基中的中藥成份之一。在培養基中加入适量血清（10%），首先可以補充細胞生長所需的生長因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性；再次，它還能中止胰酶的作用，并保護細胞免受機械損傷等。但是血清成分複雜，不同來源、不同批号生産的血清對細胞生長作用的差異較大。血清的保存期隻有一年，不同存放時期的血清的效力也不同。所以，當新購得的血清或要在開始一個重大試驗的時候，應首先進行牛血清的篩選。

　　篩選時，通常選用正常的二倍體細胞和不太好養的腫瘤細胞，也可以使正要準備培養的細胞。另外，最好用已知優質血清作對照。

　　儀器、材料和試劑

　　儀器

　　CO2培養箱，超淨工作台，微量加樣器，滅菌鍋

　　材料

　　96孔培養闆，刻度吸管，移液管，試管，吸管，廢液缸，血球計數闆，HeLa細胞，Mel細胞

　　試劑

　　DMEM，不同批号的血清，胰酶，雙抗

　　實驗步驟

　　1.取HeLa細胞和Mel細胞（本來應該取正常的二倍體細胞和不太好養的腫瘤細胞，但是實驗室條件有限，本組做HeLa細胞），胰酶消化後，用無血清培養基（事先加雙抗）吹打成細胞懸液（避免以前血清的幹擾）。計數。

　　2.取4000個左右的HeLa細胞加入到每行的第一孔（在加之前要震蕩培養基）。本實驗經計數後應加11μL細胞。

　　3.在A和H行中第一孔加入89μL含标準血清（2004.12）的培養基。（對照組）

　　4.在A和H行中每一孔中加入100μL含标準血清的培養基。

　　5.将第一孔中的液體吸100μL至第二孔，從第二孔吸100μL至第三孔，然後相同。最後的100μL棄掉。這樣就形成了從第一個孔到最後一個孔的細胞梯度從大約2056，1028等至1個。（要吹細均勻）

　　6.每個孔再補加100μL含标準血清的培養基。這可以保證孔中的營養物質。

　　7.在B行采取同樣的方法。不同的是用含有需篩選的批号為011217血清代替标準血清。

　　8.在C至G行采用同樣的方法。血清批号分别是030224，040528，040830，041012，041016。

　　9.将96孔培養闆放入CO2培養箱37℃培養一周。

　　10.培養結束後，觀察細胞生長的情況。比較在同一細胞濃度下的不同學清對細胞生長的影響。在同一細胞濃度下細胞生長數最多的培養基所含有的血清即可作為被選擇的血清樣品。

　　實驗結果

　　從第五行開始計數，結果見下表

　　集落數第5行A

　　實驗中，我們可以看出C組細胞的集落數是最多的（相對于同一列的來說）。C組細胞是用批号為030224的血清來培養的，這說明030224号血清更能促進HeLa細胞的生長。在别的同學所作的實驗中，是E組的Mel細胞生長的最好，這說明040830更能促進Mel細胞的生長。由此看出，不同細胞是适應不同的血清的，不能一概而論。A組和H組是對照組，但并沒有長出細胞集落。這個情況在全班中普遍存在，這可能是對照組血清有問題或者做實驗時根本沒有加血清。

　　實驗讨論牛血清是細胞培養基中重要的培養成份之一，對細胞生長有廣泛影響。在細胞培養時，我們通常會加入10%的血清。血清的質量對細胞培養的成功至關重要。一般說來，牛血清包括以下成分：生長因子（如激素，白細胞介素等），他們可以促進細胞生長；貼附因子，他們可以促進細胞的貼壁，往往隻有細胞貼壁才能增值（懸浮培養的細胞除外）；蛋白質（如血清白蛋白，球蛋白等），既可以作為營養物質，又可以中止胰酶的作用；還有很多成分不明的物質。血清還可以起到解毒作用，如脂肪酸、重金屬和某些蛋白酶的毒性。血清還可以是細胞免受機械損傷。不同廠家，不同批次生産的血清質量不同，對細胞生長的作用不同，所以在拿到一個新血清或者開始重大科研實驗時，要進行新生牛血清的篩選。有些血清可能有支原體污染；不同血清對不同細胞的促進作用不同；血清放置一段時間後，營養價值會降低，所以有必要進行新生牛血清的篩選。新生牛血清最适宜被試細胞生長的血清可以用于長期的實驗。本實驗中是一次加上所有的細胞的。這樣使得每一排的細胞總數的差異減到最小，從而使得系統誤差減小；而且，這種方法方便快捷，效率也有所提高；試驗結果顯示，我們的這種方法卻是較為優越。

更多精彩资讯请关注tft每日頭條，我们将持续为您更新最新资讯!