胎牛血清 胎牛血清由上海越研生物科技有限公司供應，該産品簡介:胎牛血清

　　胎牛血清的詳細介紹胎牛血清

　　細胞培養基的幾個問題

　　L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基後，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間後會降解，但是确切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導緻氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。GlutaMAX-I是什麼？培養細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩定？GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。什麼培養基中可以省去加酚紅？酚紅在培養基中用作PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模拟固醇類激素的作用，（特别是雌激素）。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅幹擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。如何用台盼蘭計數活細胞？用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，在0.1毫升細胞懸液中加0.1毫升0.4％的台盼蘭溶液。輕輕混勻，數分鐘後，用血球計數闆計數細胞。活細胞排斥台盼蘭，因而染成藍色細胞是死細胞。培養基中丙酮酸鈉的作用是什麼？丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什麼？二價離子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合遊離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養基中所有的二價離子。室溫下配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？緩沖液PH值随溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃時，不同PH值。50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃時，不同PH值4°C25°C37°C8.18.28.38.48.58.68.78.88.99.09.19.29.39.48.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.58.68.78.87.27.37.47.57.67.77.87.98.08.18.28.38.48.5如何從T25瓶中轉移sf9細胞？能用胰蛋白酶消化嗎？我們推薦使用脫落細胞的方法，此技術破壞性最小，生活力最高。通過使用巴斯德吸液管，讓細胞上培養基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養瓶。隻有在絕對必要的情況下，才使用胰酶消化細胞。胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞：1.去除培養基。2.用2ml1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細胞表面）。4.37℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘後它們正在向上移動。5.向細胞中加入2ml細胞培養液，移入錐形管，用2ml培養液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養基中的FBS終止了胰酶的活性。）6.離心（1100rpm）沉澱細胞。去除培養基。7.用新的培養基重新懸浮細胞。傳代。39.在Sf9,Sf21,和highFive細胞懸浮培養時，肝素的使用量是多少？為了防止懸浮培養細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？随着傳代的次數的增加，它的感染能力會降低嗎？通常情況當細胞經過30次傳代後，應該返回凍存。無論什麼時候計數時，都應該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力将不在是有效的。貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基，在放置幾天後顔色變紫?這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導緻了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養箱孵育培養基10-15分鐘，來校正溶液的pH值（确定松開瓶口以保證氣體交換）。細胞培養基偶然被凍，可否繼續使用？如果細胞培養基偶然被凍，您應該熔化培養基并觀察是否有沉澱産生。如果沒有沉澱産生，培養基可以正常使用，如果出現沉澱，隻能丢棄這些培養基。無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。培養基中添加了血清和抗生素後，可長期保存嗎？一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周内使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍後就開始降解。培養基及其它添加物和試劑可反複凍融嗎？大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉澱，将會影響它的性能。為什麼要在溶解的一周内使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩定。保存血清最好的方法?我們建議血清應保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器内，再放回冷凍。如何解凍血清才不會使産品質量受損?将血清從冷凍箱取出後，先置于2～8℃冰箱使之融解，然後在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。血清解凍後發現有絮狀沉澱物出現，該如何處理?血清中沉澱物的出現有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍後，也會存在于血清中，亦是造成沉澱物的原因之一。但這些絮狀沉澱物，并不影響血清本身的質量。若欲去除這些絮狀沉澱物，可以将血清分裝至無菌離心管内，以400g稍微離心,上清液即可接着加入培養基内一起過濾。最好不使用過濾的方法去除這些絮狀沉澱物，因為它可能會阻塞過濾膜。為什麼要熱滅活血清?加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小闆釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示，經過正确處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉澱物的形成會顯著的增多，這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉澱物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更确保血清的質量!為什麼儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉澱?有些胎牛血清産品沒有預老化，儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在－20℃儲存胎牛血清，避免反複凍融。如何避免沉澱物的産生?我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作:（1）解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如-20℃至37℃），非常容易産生沉澱物。（2）解凍血清時，請随時将之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉澱的發生。（3）請勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。（4）血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。（5）若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且随時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉澱物的增多。

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