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什麼是方法驗證？

藥學方法學驗證定義：方法驗證即根據檢驗項目的要求，預先設置一定的驗證内容和驗證标準要求，并通過設計合理的實驗來驗證所采用的分析方法是否符合檢驗項目的要求。

什麼時候要方法驗證？

一、建立質量标準時，應對分析方法中的各檢驗項目進行完整的驗證。

當藥品生産工藝變更，制劑的組分變更，原分析方法修訂時，可根據變更的内容決定對分析方法進行部分驗證，還是完整的驗證。

二、當原料藥合成工藝發生變更時，可能引入新的雜質，雜質檢查方法和含量方法的專屬性就需要進行驗證，以證明有關物質檢查方法能夠檢測新引入的雜質，且新引入的雜質對主成份的含量測定應無幹擾。

三、當質量标準中某一項目分析方法發生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發生改變，則需要重新進行檢測限、定量限、專屬性、準确度、精密度、線性等内容的驗證，證明修訂後的分析方法的合理可行。

當變更達到一定程度時，則需要完整的驗證。如分析方法完全改變，則應按新方法進行完整的驗證。

四、對于僅需按照實驗室日常測試操作步驟即可測定的檢驗項目不需要進行驗證，如外觀、崩解時限、密度、重量、pH 值、灰分、裝量等。

檢驗項目與驗證指标有哪些？

檢驗項目分類：為鑒别、雜質定量檢測、雜質定性檢測，含量測定、溶出度測定、校正因子六類。

鑒别類主要驗證指标：專屬性、耐用性

雜質定量檢測驗證指标：準确度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性、範圍、耐用性。

雜質定性檢測驗證指标：專屬性、檢測限、耐用性。

含量測定驗證指标：準确度、精密度、專屬性、線性、範圍、耐用性。

溶出測定驗證指标：準确度、精密度、專屬性、線性、範圍、耐用性。

校正因子驗證指标：準确度、精密度、專屬性、定量限、線性、範圍、耐用性。

各驗證指标驗證試驗應該怎麼做？

（一）準确度

定義：采用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度。

測定濃度：

1. 含量：标示量80%、100%、120%，每個濃度各3份

2. 雜質測定：雜質限度濃度50%、100%、150%，每個濃度3份

數據要求：

1. 需報告已知加入量的回收率（%）

2. 需測定結果的相對标準偏差。

回收率限度要求：

1. 根據待測物質含量不同，回收率限度也不同。

2. 一般主成分含量測定，采用高效液相測定法，回收率限度控制在98%至102%。

3. 一般雜質定量測定，根據雜質限度不同，回收率限度也不同。如雜質限度為0.1%，回收率限度控制在90%至110%。如雜質限度為1%，回收率限度控制在95%至105%。

（二）精密度

精密度定義：在規定的條件下，同一份均勻供試品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。

測定濃度：設計3個不同濃度，每個濃度3份。或設計100%濃度水平供試品6份

數據要求：需報告标準偏差、相對标準偏差。

相對标準偏差可接受範圍：

1. 根據待測物質含量不同，相對标準偏差可接受範圍也不同

2. 一般主成分含量測定，采用高效液相測定法，相對标準偏差可接受範圍控制在±2%。

3. 一般雜質定量測定，根據雜質限度不同，相對标準偏差可接受範圍也不同。如雜質限度為0.1%，相對标準偏差可接受範圍控制在±6%。。如雜質限度為1%，相對标準偏差可接受範圍控制在±5%。

（三）線性與範圍

線性定義：線性指在設計的範圍内，測定響應值與試樣中被測物濃度呈比例關系的程度 。

範圍定義：範圍指分析方法能達到一定精密度、準确度和線性要求時高低限濃度或量的區間。

測定濃度：

1. 含量測定：至少标示量的80%到120%，推薦50%到150%。

2. 雜質定量測定：定量限至限度的200%。

3. 溶出度測定：限度的80%到120%。如果規定了上下限，且上下限範圍浮動不一緻。測定濃度應為下限的負20%至上限正20%。

4. 上述濃度覆蓋範圍為最低要求，實際實驗可根據項目要求拓寬濃度覆蓋範圍。在設計濃度範圍内至少設計5個梯度濃度點。

數據要求：進行線性回歸，給出回歸方程與線性圖譜，報告相關系數r，截距及其與100%濃度的比值。

相關系數要求：

1. 雜質定量測定：r≥0.990

2. 含量測定：r≥0.998

3. 溶出度/釋放度測定:r≥0.990

（四）檢測限與定量限

檢測限的定義：檢測限指試樣中被測物能被檢測出的最低量。

定量限的定義：定量限指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果 應符合準确度和精 密度要求 。

測定濃度：可以用線性溶液逐級稀釋配制定量限或檢測限溶液

測定方法：

1. 直觀法：用已知濃度的被測物 ，試驗出能被可靠地檢測出/定量檢測出的最低濃度或量。

2. 信噪比法：用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信号，與空白樣品測出的信号進行比較，計算出能被可靠地檢測出或定量檢測出的被測物質最低濃度或量。

3. 響應值标準偏差和标準曲線斜率法：

4. 一般推薦使用信噪比法。

數據要求：

信噪比法-檢測限：S/N≥3，n≥3，RSD≥20%

信噪比法-定量限：S/N≥10， n≥5，RSD≥10%

（五）耐用性

耐用性定義：指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為所建立的方法用于日常檢驗提供依據。

耐用性适用範圍：

1方法開發與篩選時，應考慮其耐用性。

2若測定條件苛刻，應在方法/标準中進行注明可接受變動的範圍。

3可以通過單因素變動，确定可變動的範圍。

4可接受變化範圍内，各條件下系統适用性應滿足要求，測定結果與原條件相比應無變化。

液相色譜法典型的變化條件：樣品的提取次數、樣品的提取時間、流動相組成、流動相pH值、流速、色譜柱柱溫、色譜批号/品牌等。

氣相色譜法的典型變化條件：色譜批号/品牌、固定相、不容類型單體、載氣流速、柱溫、進樣口溫度、檢測器溫度。

（六）專屬性

專屬性定義：其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可能存在下，釆用的分析方法能夠正确鑒定、檢出被分析物質的特性。

專屬性試驗适用範圍：

1. 鑒别反應、雜質檢查、含量測定均應考察其專屬性

2. 如一種方法不夠專屬，可由其它分析方法予以補充

數據要求：

1. 強制降解試驗應報告雜質歸屬、物料守恒、峰純度、降解率，必要時進行降解機理分析。

2. 物料守恒應在80%到120%之間。

3. 應提供專屬性試驗圖譜。

4. 強制降解試驗時，同步進行空白平行試驗，排除空白幹擾。

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