ags細胞培養實驗?簡介内容來源：組織培養和分子細胞學技術（北京出版社），接下來我們就來聊聊關于ags細胞培養實驗?以下内容大家不妨參考一二希望能幫到您!

ags細胞培養實驗

簡介

内容來源：組織培養和分子細胞學技術。（北京出版社）

操作方法

原理

包括人在内的各種成纖維細胞都很容易培養，也是其它組織培養時的副産物，極易獲得。人的成纖維細胞不僅容易培養，而且生物性狀穩定，很難發生轉化，成為二倍體細胞培養的主要對象，人的二倍體細胞系，主要為成纖維細胞。

材料與儀器

細胞胰蛋白酶剪刀

步驟

為獲取大量成纖維細胞培養，以便凍存，用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和内髒，剪成小碎塊後，用胰蛋白酶消化法培養；如為人胚，可取皮膚培養。幼兒包皮是培養成纖維細胞的很好對象。

二、巨噬細胞培養實驗

原理

巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得，便于培養，并可進行純化。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活2~3周，因之多用作初代培養。巨噬細胞也能建成無限細胞系；大多來自小鼠，如P388D-1、J774A.1、RAW309、Cr.1等，均已獲惡性。培養中的巨噬細胞仍保留着原有形态特點和吞噬異物功能，并易于傳代和從培養瓶壁分離，但卻難以建立成為傳代細胞系。

材料與儀器

Eagle肝素血清解剖台蠟闆鑷子解剖剪注射器針頭離心管吸管培養瓶細胞計數器

步驟

培養巨噬細胞可用各種方法和各種來源獲取細胞，其中以小鼠腹腔取材法最為實用。人的材料除來源不同外，培養方法大同小異。

1.實驗前三天，向每隻小鼠腹腔内注入無菌硫羟乙酸肉湯1 ml（勿注入腸内）；2.引頸殺死動物；手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒；3.置動物于解剖台上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁；4.再用70%酒精擦洗腹膜壁後，用注射器吸10 ml Eagle液注入腹腔中，同時從兩側用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔内充分流動；5.用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管内；6.小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250 g（4℃）離心10分鐘後，去上清，加10 ml Eagle培養基；7.計數細胞，每隻小鼠可産生20~30×106細胞，其中90%為巨噬細胞；8.為獲取3×105個貼附細胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml；9.為純化培養細胞，去除其它白細胞，接種數小時後，去除培養液，用Eagle液沖洗1~2次後，再加新Eagle培養液置37℃CO2溫箱中培養。

常見問題

一、培養技術要點1.來源和取材巨噬細胞可來源于人胸水、腹水、血和透析液等材料。實驗多從動物血液、肺、脾和胸腹腔獲取，其中以從動物腹腔取材最常用。在不加任何刺激物自然情況下，一個小鼠腹腔中，就含有2~3×106個細胞，而且大多無炎症反應，沖先出來即可用于培養。如欲獲取多量巨噬細胞，可于取材3~5天前，向動物腹腔中注射刺激物，便能獲得大量細胞。刺激物種類很多，如牛血清、礦物油、硫羟乙酸鹽肉湯等，均能刺激産生大量巨噬細胞；缺點是很多刺激物能激活吞唾細胞并被其吞噬，進行培養以後，刺激物常不能很快被消化掉，殘留在細胞内，能幹擾細胞代謝。用40μg的PHA注入腹腔中，能産生6~8×106個細胞，而且無刺激性，效果較好。從500 ml血中能獲取108個單核細胞，但易雜以血小闆及其它白細胞，尚需做進一步的分離和純化。2.純化和分離從各種來源和用各種方法所獲的巨噬細胞群中，多混有其它細胞成分，如淋巴細胞、中性細胞、血小闆和成纖維細胞等，應把它們分離出去。附着分離法比較實用，原理是借用大多數單核巨噬細胞有極易附着于玻璃表面的特性，在先把細胞群置于玻璃培養容器中數小時後，巨噬細胞能最先附着于玻璃表面，此時再用培養液或PBS沖洗掉尚未附着的中性粒細胞和激活的T淋巴細胞等，剩餘巨噬細胞純度可達95%。如中性粒細胞也附着，可繼續延長時間至24小時，此時大多數巨噬細胞都已附着于瓶壁，而中性粒細胞可變性死亡。繼之再從瓶壁上把巨噬細胞分離下來進行培養，便獲得純淨巨噬細胞。巨噬細胞對胰蛋白酶和EDTA均不敏感，不易使之離壁，必要時可用膠刮刮除，但可能損傷細胞。用不加防腐劑的純利多卡因處理（幹液為PBS配的360 mM液，用1 N NaOH調節pH值到6.6，同時稀釋成12 mM濃度），加入培養基中，37℃作用5分鐘，可使巨噬細胞變圓，此時稍加吹打，即可使細胞分離。注意要控制好作用的時間，以免細胞丢失。3.培養條件據實驗目的不同，可選用各種培養基：如199（加新鮮谷氨酰胺加青鍊黴素）；NCTC-135；RPMI 1640；Ham12等均适于巨噬細胞培養。大多數巨噬細胞培養可加10%~40%的血清，小鼠巨噬細胞加10%小牛血清，用無血清培養基亦可。新生小牛血清中含有抗體，能刺激巨噬細胞成熟。也可用乳清蛋白培養。巨噬細胞适于CO2溫箱培養，pH7.2，細胞接種密度以2~4×105/cm2為宜。4.生物性狀和鑒别培養中的巨噬細胞在很多方面與淋巴細胞或其它白細胞相似，應嚴加區别。正常巨噬細胞能附着瓶壁，胞質延展，細胞大小介于10~50微米之間，胞核呈特有的腎形，胞質有皺褶，細胞群多時能連接成單層；有時細胞呈多角形并連接成網狀。巨噬細胞對胰蛋白酶有抵抗性，借此可下其它細胞相區别，也是淘汰其它細胞的方法。單核巨噬細胞胞質中含有豐富的非特異性脂酶，并具有C3b和FC表面受體。巨噬細胞對培養環境敏感，很易發生與在體内時很大不同的改變；有強烈的吞噬活動。如向培養環境中加入澱粉粒、乳膠粒、紅細胞及調理素（或新鮮血清、特異抗體）等，可見巨噬細胞能吞噬五個以上的顆粒。細胞狀态不良時，胞質常不延展，胞體變圓，不透明，或脫離瓶壁飄浮在培養液中和失去吞噬能力。

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