超氧化物歧化酶（SOD）是生物體系中抗氧化酶系的重要組成成員，廣泛分布在微生物、植物和動物體内。其是在上個世紀末才被發現，可以說是生物醫學研究史上的一項重大成果,于人類生命研究具有極其重要的意義。今天我們就給大家分享一下如何通過比色法測定植物酶活SOD。

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所有試劑除注明者外，均為分析純。

1.1 磷酸緩沖液：

A液：0.2M的KH2PO4溶液 分析純KH2PO4  27.216克，用蒸餾水定容至1000毫升。 

B液：0.2M的K2HPO4溶液 分析純K2HPO4•3H2O 45.644克，用蒸餾水定容至1000毫升。

或 

A液：0.2M的NaH2PO4溶液 分析純NaH2PO4•2H2O  31.21克，用蒸餾水定容至1000毫升。 

B液：0.2M的Na2HPO4溶液  分析純Na2HPO4•12H2O 71.64克，用蒸餾水定容至1000毫升。

1.2 母液的配制： 

（1）0.5M 磷酸緩沖液（PH=7.8）：A液21.25ml B液228.25ml定容至1000ml； 

（2）130mM Met(甲硫氨酸)：取1.9399克Met 用磷酸緩沖液（PH=7.8）定容至100ml； 

（3）750μM四氮唑藍（NBT）：取0.06133gNBT用磷酸緩沖液（PH=7.8）定容至100ml(避光保存)； 

（4）100μM EDTA-Na2：取0.0372g EDTA-Na2用磷酸緩沖液（PH=7.8）定容至1000ml； 

（5）20μM FD (核黃素)：0.00753gFD用磷酸緩沖液（PH=7.8）定容至1000ml（現配現用）。 

1.3 SOD反應液： 

磷酸緩沖液（PH=7.8）：Met：NBT：EDTA-Na2：核黃素（FD）：H2O的比例為15：3：3：3：3：2.5，按母液順序配制。 

萬分之一分析天平、紫外分光光度計、醫用離心機、研缽

取新鮮樣本剪碎充分混勻後，裝入樣本瓶放入4℃冷藏備用。

4.1 酶液的制備： 

稱取鮮樣0.5g放入研缽中，加5毫升PH=7.8的磷酸緩沖液，冰浴研磨，勻漿倒入離心管中，冷凍離心20分鐘（10000×g），上清液（酶液）倒入試管中，置于0～4℃下保存待用。 

4.2 SOD的測定 

取型号相同的試管，吸取20ul的酶液，加入3ml反應液，4000Lux照光（多用為環形日光燈的光照培養箱）30分鐘（盡量做到照光情況一緻）

4.3 空白與對照的制備

同時取四支試管，三支做對照（CK），一支做空白（不加酶液，以緩沖液代替）；空白置暗處，對照（CK）與酶液同至于4000Lux條件下照光30分鐘，遮光保存，以空白調零，560nm比色。 

4.4 若光照後顔色過深，可适當多取酶液進行測定

SOD總活性（吸光度/g·FW）=（ACK—A）×V／（W×0.5×ACK）

式中：

ACK--為對照在560nm下測得的吸光度；

A--為試樣在 560nm下測得的吸光度；

V--為提取液體積，ml；

W--為稱取試樣鮮重的質量，g；

0.5--為光照時間，h；

單位：NBT光還原50%為單位 

SOD比活性（酶單位/mg蛋白）= SOD總活性/可溶性蛋白質濃度

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