以下内容出自專業期刊上2016年發表的一項研究，具有代表性。具體如下：

原題目（翻譯）：EMB瓊脂和HiCrome大腸杆菌瓊脂對都産生綠色金屬光澤的非大腸杆菌與典型大腸杆菌鑒别能力的比較評估

原題目：Comparative Evaluation of EMB Agar and Hicrome E. coli Agar for Differentiation of Green Metallic Sheen Producing Non E. coli and Typical E. coli Colonies from Food and Environmental Samples

出處：Journal of Pure and Applied Microbiology. 2016,10(4)

糞大腸菌群或大腸杆菌的濃度常決定了食品和水的衛生質量。為了保障公共安全，娛樂用水、飲用水源和養殖用水常需嚴格監測。為實現這些評估要求，大腸杆菌的分離和鑒定是必要的先決條件，但實踐中遇到的情況千變萬化，因為存在其他的腸道幹擾菌如檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸杆菌屬。它們也發酵乳糖，并且在EMB瓊脂（伊紅美蘭瓊脂，常用于腸杆菌科成員的分離計數鑒别）上表現為相似的菌落特征。這些大腸菌群與糞大腸菌群不同，也存在于其他環境中，它們的存在并不指示有糞便污染。實際上常用BGLB肉湯和更高的孵育溫度（44.5℃）區分這些競争菌群，但并不總能如此，因為它們也常常表現為相似的反應。

特别是當這些競争菌群數量都較多時，問題更為突出，結果使假陽性數量增多，降低了選擇培養基的效率。但很少有人提出解決方案。目前有很多報道使用顯色培養基分離腸出血性大腸杆菌O157:H7，但關于其他血清型的大腸杆菌的分離鑒别則很少。因此，應嘗試采用更新的培養基和方法來快速、準确的分離這種指示菌，從而有助于避免錯誤的解讀。

本文比較了一種顯色培養基HiCrome E.coli瓊脂（HiMedia，印度）和EMB瓊脂在分離不同來源大腸杆菌的性能（HiMedia,印度）。相伴随的幹擾菌群也進行了鑒定，并且與大腸杆菌進行了系統發生學上的比較。

材料與方法

細菌培養和标準菌株

本研究納入了400株疑似大腸杆菌的分離株，它們來自不同樣本：活蛤蜊（n = 140）、市場上的雙殼貝類肉（n = 45）、水（n=100）和熱帶沉積物河口（n = 100）和飲用水（n=15）。

大腸杆菌ATCC 25922和4個其他菌株GenBank号為JX183939.1、JX183940.1、JX183941.1和JX183942作為标準參照菌株。

取樣、分離和生化分析

按照标準指南進行樣本無菌收集和處理（見注1）。大約25克貝類肉無菌轉移到無菌的勻漿袋中，并在一個勻漿袋（IUL Instruments，西班牙）中與225毫升無菌蛋白胨水混合。使用5管含乳糖的肉湯對大腸杆菌分離株進行MPN檢測。

同樣，沉積物和水樣也進行稀釋（1：9比例），并按同樣方法檢查大腸杆菌的存在。在44.5°C溫育24-48小時進行乳糖發酵的檢測。從顯示生長和産氣的管中取樣，用接種環在常規Levine's Eosin-methylene blue瓊脂（L-EMB，Himedia，印度）或Hicrome大腸杆菌瓊脂上劃線。在37℃孵育24小時後觀察平闆。關于EMB，像大腸杆菌這樣強烈産酸的菌落有綠色金屬光澤，并顯示中心黑色。在酸性條件下，染料伊紅Y發生沉澱，産生黑色菌落。綠色金屬光澤是由于伊紅Y和亞甲基藍之間形成酰胺鍵。另一方面，Hicrome大腸杆菌瓊脂檢測大腸杆菌是基于葡糖醛酸糖苷酶的存在。培養基中的顯色底物p-硝基苯-p-D-吡喃葡萄糖醛酸（PNPG）被大腸杆菌吸收。大多數大腸杆菌（O157：H7除外）含有β-葡糖醛酸酶，能裂解顯色底物發色團與葡萄糖醛酸苷之間的化學鍵，釋放前者，産生藍綠色菌落。在測試樣品之前，使用五種标準菌株，在控制條件下，對兩種培養基的有效率進行了評估。EMB瓊脂和Hicrome大腸杆菌瓊脂都是100％。典型菌落采用IMViC試驗進行了生化鑒定，包括吲哚産生試驗，甲基紅試驗，伏普試驗和檸檬酸鹽利用試驗。

檢測uid A基因進行分子驗證（略）

大腸杆菌的血清分型（略）

16S rRNA擴增測序（略）

系譜發生分析（略）

統計學分析

%靈敏度 = 真陽性 x 100 / (真陽性 假陰性)

%特異性 = 真陰性 x 100 / (真陰性 假陽性)

% 有效率 = (真陽性 真陰性) x100 / 全部

結果和讨論

EMB瓊脂和Hicrome大腸杆菌瓊脂在五種标準菌株的識别中顯示出100％的有效率（數據未提供）。然而，在天然樣品中，當都産生金屬光澤的非大腸杆菌和真正的大腸杆菌都存在時，問題就來了。兩種培養基分離鑒定大腸杆菌的結果見表1和表2。在EMB瓊脂上假陽性率非常高（40％），而在Hicrome上則非常低（0.5％）。 假陰性在EMB瓊脂上也很高（15.75％），這是由于真正的大腸杆菌被高度粘液狀背景菌群所掩蓋，而在Hicrome大腸杆菌瓊脂上，沒有檢測到假陰性（表1）。同時，Hicrome的靈敏度、特異性和有效率遠遠高于Levine’s

EMB瓊脂（表2）。

大腸杆菌和非大腸杆菌在HiCrome大腸杆菌瓊脂和EMB瓊脂上的生長狀況

真正的大腸杆菌在EMB瓊脂上産生非常亮的金屬光澤菌落，在Hicrome大腸杆菌瓊脂産生藍綠色菌落（圖1）。相反，在EMB上大量典型的具有亮金屬光澤的大腸杆菌疑似菌落，在Hicrome大腸杆菌瓊脂上為白色菌落。生化鑒定顯示，它們不是大腸杆菌（圖2）。實驗還觀察到，如果樣品中大腸杆菌的濃度較低，其光澤就會被高粘液狀背景菌群如克雷伯氏菌所掩蓋（圖3），導緻假陰性結果，它可以通過使用Hicrome大腸杆菌瓊脂進行有效區分。

圖1a. EMB瓊脂上産生亮金屬光澤的大腸杆菌菌落

圖1b. HiCrome E. coli agar上的藍綠色大腸杆菌菌落

圖2a. EMB瓊脂上産生亮金屬光澤的假陽性的非大腸杆菌菌落

圖2b. 相應菌落在HiCrome E. coli agar的形态顔色

圖3a. EMB瓊脂上的幹擾菌落

圖3b.相應菌落在HiCrome E. coli agar上。藍綠色真正大腸杆菌的菌落與白色菌落的幹擾菌群可以清楚的區分

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