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自制血清替代物

健康 更新时间:2025-02-04 03:08:15

  目的:建立一種人表皮幹細胞的無血清培養方法,并與目前表皮幹細胞常用的有血清培養方法進行比較,探讨該條件是否更适合表皮幹細胞的生長和有利于實施表皮幹細胞的調控,提高實驗的準确性。方法:實驗于2002-05/200

  【文摘】目的:建立一種人表皮幹細胞的無血清培養方法,并與目前表皮幹細胞常用的有血清培養方法進行比較,探讨該條件是否更适合表皮幹細胞的生長和有利于實施表皮幹細胞的調控,提高實驗的準确性。方法:實驗于2002-05/2004-07在江西醫學院第二附屬醫院醫學分子中心完成。①從幼兒包皮中分離表皮細胞、用膠原Ⅳ分别黏附表皮細胞10~15min,收集黏附細胞,即為純化的表皮幹細胞。②分3組進行培養,3組培養條件均有無鈣低糖Dulbecco改良的Eagle培養基,0.05mmol/LCaCl2,10μg/L表皮細胞生長因子,1×10^-6mol/L氫化可的松;有血清培養組還含有100g/L螯合鈣的幹細胞專用血清;無血清培養組1還含有100g/L無血清培養基血清替代物。無血清培養組2還含有100g/L無血清培養基血清替代物和50μg/L牛垂體提取物。③培養20d後。在倒置顯微鏡下對所培養細胞進行形态學觀察;同時計數細胞數(大于100個細胞團為1個集落稱克隆),計數各組克隆數;采用胰酶消化傳代,計數傳代數及多次傳代後所得細胞總數;流式細胞術分析α6,CD71(人表皮幹細胞表面标記)的表達情況,計算人表皮幹細胞α6briCD71dim細胞百分率;采用流式細胞術進行細胞周期分析處于靜止期/DNA合成前期人表皮幹細胞百分率,采用免疫組化法鑒定細胞角蛋白19及5/8(均表明人表皮幹細胞生長情況,且以角蛋白19更能明确表明人表皮幹細胞生成情況)和角蛋白10表達情況。結果:①人表皮幹細胞細胞形态學觀察結果:應用倒置顯微鏡下觀察檢測,無血清培養組1與有血清培養組人表皮幹細胞細胞形态學基本相同,無血清培養組1集落形成時間稍晚于有血清培養組。②形成的克隆數及經胰酶消化可傳代數、細胞總得數:胰酶消化傳代後,形成的克隆數、細胞總得數及細胞傳代數無血清培養組1與有血清培養組相近(P>0.05),兩組形成的克隆數、細胞總得數明顯低于無血清培養組2

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