Leon Scott Kennedy|裡昂·斯科特·肯尼迪 配音：Matthew Mercer|馬修·麥瑟(英語)；森川智之(日語)；本作三大主角之一，36歲。《生化危機》系列的主要角色，曾擔任2代、4代的主角。美國總統的的直屬特工，原本是一名警察，“浣熊市事件”之後他與美國政府在一個未公開的交易中以自己為代價，換取了美國政府保證雪莉·柏金的安全。在成功完成多次危險任務後，他的能力得到美國政府的認可，并且備受總統信賴，後來成為DSO（安全維和組織）的發起人之一。2013年，裡昂再次被卷入了一場生化恐怖襲擊中，面對一直提拔自己的老朋友——已經變異成喪屍的現任美國總統亞當·本福德，他不得不做出個人生命中最艱難的決定。 特殊武器/能力：“羽翼射手”半自動雙槍——切換雙槍模式施展連續快速射擊能将敵人打至浮空，動作華麗帥氣，對雜兵控場能力一流。

　　Helena Harper|海倫娜·哈伯 配音：Laura Bailey|勞拉·貝利(英語)；佐古真弓(日語) 遊戲中裡昂的搭檔，24歲。和裡昂一樣，海倫娜也是一名美國政府的特工。作為一名聯邦探員，海倫娜擁有極強的道德感，從不推卸責任，但這也導緻她時不時會被自己的情緒所左右。在同僚當中，她的能力出類拔萃，并曾是特工機構招募DSO特工的候選人首選，生化恐怖襲擊事件發生之時她被USSS（美國特勤局）調往擔任總統警衛。妹妹黛博拉·哈伯是她在世上唯一的親人，正是由于她在情緒控制上的弱點和對妹妹的溺愛，使得她成為西蒙斯暗殺總統計劃中的一枚棋子。 特殊武器/能力：“九頭蛇”霰彈槍——連續快速射擊華麗且實用，子彈射完後自動一次性上膛，能将“最後一發子彈”技能的作用發揮到極緻。

　　Chris Redfield|克裡斯·雷德菲爾德；配音：Roger Craig Smith|羅傑·克雷格·史密斯(英語)；東地宏樹(日語)；本作三大主角之一，39歲。《生化危機》系列的主要角色，曾擔任1代、5代的主角。BSAA北美支部Alpha小隊隊長，原S.T.A.R.S.成員，曾在美國空軍服役，後加入BSAA組織（生化恐怖防禦與評估聯盟），成為創始11人之一。故事開始半年前，在東歐戰場上平定變種叛軍的克裡斯遭受暗算并喪失記憶，後來被皮爾斯在一家酒館中尋獲而重新加入BSAA。2013年，在中國——這個世界人口最多最密集的地方，發生了大規模的生化恐怖襲擊事件，雖然最開始心裡搖擺不定，克裡斯最終還是決定前往這個東方大國。 特殊武器/能力：戰鬥匕首——裝備後部分體術傷害值暴漲，快速連刀技巧效果拔群，高端玩家手中的神器。

　　Piers Nivans|皮爾斯·奈文斯，配音：Christopher Emerson|克裡斯多夫·艾默生(英語)；阪口周平(日語)；遊戲中克裡斯的搭檔，26歲。和克裡斯一樣，皮爾斯同屬BSAA北美支部。作為一名天才狙擊手，皮爾斯擁有着優秀的動态視力和集中力。他出生于軍人世家，自記事起便想追随父親的腳步，成為一名出色的軍人。軍校畢業後，他成為了一名特種兵，然而此時的他卻漸漸地迷失了自己的信仰，直到他遇見了克裡斯，并受邀加入BSAA後才重新找回了自己的人生目标。對于克裡斯隊長，皮爾斯一向對他保持着最高的敬意，而克裡斯對他也十分地信任，并希望他将來能成為自己的接班人。 特殊武器/能力：反器材狙擊步槍——配備有熱能感應裝置，能看到黑暗或煙霧中的敵人，可用切槍和換邊來大幅度提升攻擊速度。

　　Jake Muller|傑克·穆勒，配音：Troy Baker|特洛伊·貝克(英語)；浪川大輔(日語)；本作三大主角之一，20歲。出身于一個沒有父親的單親家庭，母親患有慢性病，并不富裕的家境使得他的母親遲遲得不到徹底的治療而無法痊愈。傑克長大後，為了讓母親能接受更好的治療，成為了一名反政府武裝的戰士。隻可惜，在傑克成為雇傭兵後不久，他的母親就因病去世了。從此以後，傑克變得對金錢異常執着。一天，他的面前出現了一名金發女子——雪莉·柏金，她告知傑克他擁有拯救世界的可能性。雖然聽起來很荒謬，傑克還是以五千萬巨額現金作為交易條件接受了雪莉的保護。在逃亡的過程中，一個駭人聽聞的真相突然向他襲來，他的身體中流淌着阿爾伯特·威斯克那“被詛咒的血”的事實。特殊武器/能力：徒手——蓄力五連擊效果出衆，沖刺過程中可閃避攻擊，操作得當者能僅憑徒手通關最高難度。

　　Sherry Birkin|雪莉·柏金，配音：Eden Riegel|伊登·裡格爾(英語)；坂本真绫(日語)；遊戲中傑克的搭檔，26歲。她是1998年浣熊市慘劇中，G病毒開發者柏金夫婦的女兒。幸運的是，她在裡昂和克萊爾的幫助下從猶如地獄般的小鎮中逃出。當時，她的父親——威廉·柏金在她的體内植入了G病毒胚胎，潛在的威懾讓她一直處在美國政府的監控之下。幾年之後，作為交換自由的條件她成為了美國特工。不久，雪莉接到了一個艱難的任務——潛入東歐戰亂紛飛的伊東尼亞共和國，保護被認為擁有“特殊的血”的男人傑克·穆勒。面前的傑克就像是曾經的自己，而對于從小生活在戰亂紛飛地帶的傑克來說，雪莉的善良和使命感就像金子一般珍貴。 特殊武器/能力：電擊棒——攻擊敵人能輕易将其打出硬直狀态，蓄力後可提升威力和連段數。

　　Ada Wong|艾達·王，配音：Courtenay Taylor|考特尼·泰勒(英語)；皆川純子(日語)；本作的隐藏主角，年齡、真實姓名、所屬組織、目的均不詳的自由國際間諜。1998年的浣熊市慘劇中，她出現在了裡昂的面前，當時她的任務是奪取雪莉·柏金的父親——威廉·柏金博士開發的最新型生化病毒——G病毒。自此，她與裡昂之間複雜的關系一直成為生化迷們津津樂道的話題。在本作中她是所有故事的主要起因，串連前面三組主角的故事和結局。 特殊武器/能力：十字弩——可切換普通箭和爆炸箭，快速射擊動作優雅且能自動裝填，并且使用弩箭殺敵不會觸發警報。

　　Derek C. Simmons|德雷克·C·西蒙斯，配音：David Lodge|大衛·洛奇(英語)；菅生隆之(日語)；美利堅合衆國首席國家安全顧問，46歲。一個性格殘忍的完美主義者，神秘組織“家族（Family）”的領導人。該組織一直緻力于維護自己所倡導和營造的社會秩序及穩定，并為此不擇手段，不計代價。由于擔心總統公布“浣熊市事件”真相可能造成的混亂而策劃了生化恐怖襲擊殺害了總統。

　　Adam Benford|亞當·本福德，配音：Michael Donovan|邁克爾·多諾萬(英語)；佐佐木勝彥(日語)；美國現任總統，他是阿什莉父親之後的下一任總統。在常春藤大學的演講中計劃将當年“浣熊市事件”的真相公布于衆，結果在演講當天發生了一場大規模的生化恐怖襲擊，自己也變成了喪屍，最後被裡昂射殺。

　　Ingrid Hunnigan|英格莉·哈尼根，配音：Salli Saffioti|莎莉·西菲奧迪(英語)；杉本優(日語)；FOS（外勤行動支援部）的情報人員，33歲。曾在4代、惡化、詛咒中登場，她和裡昂已經共事很久，彼此之間十分信任。本作與4代一樣都是負責提供各種情報給裡昂。

　　Carla Radames|卡拉·拉達梅斯，配音：同艾達·王；今次事件的主謀，“新安布雷拉”（Neo Umbrella）的領導人。15歲時就成功取得了遺傳學博士學位，并被西蒙斯基金會下轄的研究機構雇傭，後來成為C病毒的主要開發者。愛上了西蒙斯但卻被當作克隆艾達的實驗品，在經C病毒的作用下基因重組之後變成了外表酷似艾達的克隆人，因此深深憎恨着西蒙斯，表面上遵從他的指令，暗中卻制定了毀滅世界的瘋狂計劃。

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