細胞培養實驗室的設置

組織細胞培養技術與其他一般實驗室工作的主要區别在于要求保持無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。目前，超淨工作台的廣泛使用，很大程度上方便了組織細胞培養工作，并使一些常規實驗室有可能用于進行細胞培養。

細胞培養實驗室應能進行六方面的工作：無菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。

一、無菌操作區

1.無菌操作室：無菌操作區隻限于細胞培養及其他無菌操作的區域，最好能與外界隔離，不能穿行或受其他幹擾。理想的無菌操作室應劃為三部分：

（1）更衣室—―供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

（2）緩沖間—―位于更衣間與操作間之間，目的是為了保證操作間的無菌環境，同時可放置恒溫培養箱及某些必需的小型儀器。

（3）無菌操作間—―專用于無菌操作、細胞培養。其大小要适當，且其頂部不宜過高（不超過2.5m）以保證紫外線的有效滅菌效果；牆壁光滑無死角以便清潔和消毒。工作台安置不應靠牆壁，台面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。

無菌操作間的空氣消毒：

紫外線燈—－産生臭氧，并且室内溫度及濕度均較高，不利于工作人員健康。空氣過濾的恒溫恒濕裝置—－最好。

無臭氧紫外線消毒器：

電子消毒滅菌器—－在高壓電場作用下，電子管的内外電極發生強烈電子轟擊，使空氣電離而将空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧是一種強氧化劑，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應，從而靠臭氧氣體彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒後空間的殘留臭氧隻需30～40min即能自行還原成氧氣，空氣不留異味，消毒物體表面不留殘毒。

2.淨化工作台：操作簡單，安裝方便，占用空間小且淨化效果很好。一般細菌培養室使用的淨化工作台主要有兩種：

（1）側流式或稱垂直式。

（2）外流式或稱水平層流式。

淨化工作台工作原理（大緻相同）—－通常是将室内空氣經粗過濾器初濾，由離心風機壓入靜壓箱，再經高效空氣過濾器精濾，由此送出的潔淨氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區，從而形成無塵無菌的高潔淨度工作環境。

側流式工作台—－空氣淨化後的氣流由左或右側通過工作台面流向對側，也有從上向下或從下向上流向對側，形成氣流屏障保持工作區無菌。工作台結構為封閉式。

外流式（水平式）工作台—－淨化後的空氣面向操作者流動，因而外方氣流不緻混入操作，但進行有害物質實驗操作則對操作者不利。工作台結構為開放式（已少用）。

淨化工作台應用注意：

（1）淨化工作台應安裝在隔離好的無菌間或清潔無塵的房間内，以免塵土過多易使過濾器阻塞，降低淨化效果，縮短其使用壽命。

（2）新安裝的或長期未使用的工作台，工作前必須對工作台和周圍環境用真空吸塵器或不産生纖維的工具進行清潔工作，然後再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌進行滅菌處理。

（3）使用淨化工作台前，應先用75％酒精擦洗台面，并提前以紫外線滅菌燈照射30～50min處理淨化工作區内積存的微生物。關閉滅菌燈後應啟動風機使之運轉兩分鐘後再進行培養操作。

（4）淨化工作區内不應存放不必要的物品，以保持潔淨氣流流型不受幹擾。

（5）注意淨化區内氣流的變化，一旦感到氣流變弱，如酒精燈火焰不動，加大電機電壓仍未見情況改變則說明濾器已被阻塞，應及時更換。一般情況下，高效過濾器三年更換一次。更換高過濾器應請專業人員操作，以保持密封良好。粗過濾器中的過濾布（無紡布）應定期清洗更換，時間應根據工作環境潔淨程度而定，通常間隔3-6個月進行一次。

（6）淨化工作台使用完畢應及時清理工作台面上的物品并用酒精擦洗台面使之始終保持潔淨。

（7）淨化工作台應定期進行功能測試，檢查淨化工作台各項工作指标是否達到要求，例如進行無菌試驗，定期檢查台面空氣的潔淨度是否達标。

超淨工作台的無菌程度檢查超淨工作台在消毒處理後，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數；取直徑約90mm平皿，在超淨工作台内點燃酒精燈，在酒精燈旁，以無菌操作，将平皿半開注入溶化的營養瓊脂培養基約20ml，制成平闆，在30～35℃預培養48小時，證明無菌後将平闆3個，以無菌方式帶入超淨工作台内左、中、右各放一個；打開平皿蓋扣置，平闆在空氣中暴露30分鐘後将平皿蓋蓋好，置30～35℃培養48小時，取出檢查，100級清潔度要求：3個平皿上生長的菌落數平均不得超過1個。

超淨工作台應定期請有關部門檢查其潔淨度，應達到100級（一般用塵埃粒子計數儀）檢測塵埃粒徑≤5祄的粒數不得超過3.5個／升；空氣流量應控制在0.75~1.0m3/s；細菌菌落數平均<1個，可根據無菌狀況必要時置換過濾器。

二、孵育區

本區對無菌的要求雖不比無菌區嚴格，但仍需清潔無塵，因此也應設置在幹擾少而非來往穿行的區域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行，後者費用高，一般實驗室多采用孵箱進行工作。

三、制備區

在該區主要進行培養液及有關培養用的液體等的制備。

四、儲藏區

主要存放各類冰箱、幹燥箱、液氮罐、無菌培養液、培養瓶等，此環境也需要清潔無塵。

五、清洗與消毒滅菌區

清潔和消毒滅菌區應與其他區域分開，主要進行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。

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