高效液相色譜法系采用高壓輸液泵将規定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入色譜柱内，各組分在柱内被分離，并進入檢測器檢測，由積分儀或數據處理系統記錄和處理色譜信号。

高效液相色譜測定有以下方法：

1、定性分析  常用的定性方法主要有但不限于利用保留時間定性、利用光譜相似度定性、利用質譜檢測器提供的質譜信息定性幾種。  ①利用保留時間定性  保留時間(retention time，tR)定義為被分離組分從進樣到柱後出現該組分最大響應值時的時間，也即從進樣到出現某組分色譜峰的頂點時為止所經曆的時間，常以分鐘(min)為時間單位，用于反映被分離的組分在性質上的差異。通常以在相同的色譜條件下待測成分的保留時間與對照品的保留時間是否一緻作為待測成分定性的依據。  在相同的色譜條件下，待測成分的保留時間與對照品的保留時間應無顯著性差異；兩個保留時間不同的色譜峰歸屬于不同化合物，但兩個保留時間一緻的色譜峰有時未必可歸屬為同一化合物，在作未知物鑒别時應特别注意。  若改變流動相組成或更換色譜柱的種類，待測成分的保留時間仍與對照品的保留時間一緻，可進一步證實待測成分與對照品為同一化合物。  當待測成分(保留時間 tR，1)無對照品時，可以樣品中的另一成分或在樣品中加入另一已知成分作為參比物(保留時間 tR，2)，采用相對保留時間(RRT)作為定性(或定位)的方法。在品種項下，除另有規定外，相對保留時間通常是指待測成分保留時間相對于主成分保留時間的比值，以未扣除死時間的非調整保留時間按下式計算。若需以扣除死時間的調整保留時間計算，應在相應的品種項下予以注明。  ②利用光譜相似度定性  化合物的全波長掃描紫外-可見光區光譜圖提供一些有價值的定性信息。待測成分的光譜與對照品的光譜的相似度可用于輔助定性分析。二極管陣列檢測器開啟一定波長範圍的掃描功能時，可以獲得更多的信息，包括色譜信号、時間、波長的三維色譜光譜圖，既可用于輔助定性分析，還可用于峰純度分析。  同樣應注意，兩個光譜不同的色譜峰表征了不同化合物，但兩個光譜相似的色譜峰未必可歸屬為同一化合物。  ③利用質譜檢測器提供的質譜信息定性  利用質譜檢測器提供的色譜峰分子質量和結構的信息進行定性分析，可獲得比僅利用保留時間或增加光譜相似性進行定性分析更多的、更可靠信息，不僅可用于已知物的定性分析，還可提供未知化合物的結構信息。  2、定量分析  ①内标法  按品種正文項下的規定，精密稱(量)取對照品和内标物質，分别配成溶液，各精密量取适量，混合配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量進樣，記錄色譜圖。測量對照品和内标物質的峰面積或峰高，按下式計算校正因子：  再取各品種項下含有内标物質的供試品溶液，進樣，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分和内标物質的峰面積或峰高，按下式計算含量：采用内标法，可避免因樣品前處理及進樣體積誤差對測定結果的影響。  ②外标法  按各品種項下的規定，精密稱(量)取對照品和供試品，配制成溶液，分别精密取一定量，進樣，記錄色譜圖，測量對照品溶液和供試品溶液中待測物質的峰面積(或峰高)，按下式計算含量：式中各符号意義同上。  當采用外标法測定時，以手動進樣器定量環或自動進樣器進樣為宜。  ③加校正因子的主成分自身對照法  測定雜質含量時，可釆用加校正因子的主成分自身對照法。在建立方法時，按各品種項下的規定，精密稱(量)取待測物對照品和參比物質對照品各适量，配制待測雜質校正因子的溶液，進樣，記錄色譜圖，按下式計算待測雜質的校正因子。  也可精密稱(量)取主成分對照品和雜質對照品各适量，分别配制成不同濃度的溶液，進樣，記錄色譜圖，繪制主成分濃度和雜質濃度對其峰面積的回歸曲線，以主成分回歸直線斜率與雜質回歸直線斜率的比計算校正因子。  校正因子可直接載入各品種項下，用于校正雜質的實測峰面積，需作校正計算的雜質，通常以主成分為參比，采用相對保留時間定位，其數值一并載入各品種項下。  測定雜質含量時，按各品種項下規定的雜質限度，将供試品溶液稀釋成與雜質限度相當的溶液，作為對照溶液，進樣，記錄色譜圖，必要時，調節縱坐标範圍(以噪聲水平可接受為限)使對照溶液的主成分色譜峰的峰高約達滿量程的 10%~25%。除另有規定外，通常含量低于 0.5%的雜質，峰面積測量值的相對标準偏差(RSD)應小于 10%；含量在 0.5%~2%的雜質，峰面積測量值的 RSD 應小于 5%；含量大于 2%的雜質，峰面積測量值的 RSD 應小于 2%。然後，取供試品溶液和對照溶液适量，分别進樣。除另有規定外，供試品溶液的記錄時間，應為主成分色譜峰保留時間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質的峰面積，分别乘以相應的校正因子後與對照溶液主成分的峰面積比較，計算各雜質含量。  ④不加校正因子的主成分自身對照法  測定雜質含量時，若無法獲得待測雜質的校正因子，或校正因子可以忽略，也可采用不加校正因子的主成分自身對照法。同上述(3)法配制對照溶液、進樣、調節縱坐标範圍和計算峰面積的相對标準偏差後，取供試品溶液和對照品溶液适量，分别進樣。除另有規定外，供試品溶液的記錄時間應為主成分色譜峰保留時間的 2 倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算雜質含量。  ⑤面積歸一化法  按各品種項下的規定，配制供試品溶液，取一定量進樣，記錄色譜圖。測量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分率。用于雜質檢查時，由于儀器響應的線性限制，峰面積歸一化法一般不宜用于微量雜質的檢查。

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