為什麼熒光選擇性比紫外高-tft每日頭條

為什麼熒光選擇性比紫外高

生活更新时间:2025-01-08 01:17:41

綠光蛋白GFP吸收的光譜峰值為395nm（紫外），并有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；雖然450～490nm隻是GFP的副吸收峰，但由于長波能量低，細胞忍受能力強，更适合活體檢測，因此通常多使用藍光波段光源（多為488nm）。GFP發射光譜最大峰值為509nm（綠光），并帶有峰值為540nm的側峰（Shouder）。

為什麼熒光選擇性比紫外高（為什麼藍光和紫外線激發光源能激發GFP發出綠色熒光）1

拓展：

熒光蛋白GFP發光原理

熒光蛋白發光類型屬于斯托克斯位移型，其基本原理是生色團在較高能量的光子照射下發生構象的改變，從而導緻分子能級變化，從高能級的構象躍遷向低能級時發出較低能量的光子。生色團在發光過程中主要有兩種化學過程。一是質子轉移，即質子化和去質子化，二是分子構象的改變。生色團主要有三種構象：A型、B型以及中間過渡态Z 型。在分子構象變化的同時還伴随着氫鍵的生成和斷裂，以及電荷的傳遞去質子化和質子化的分子構象不同，對應的分子能級也不同，從而其發射光譜中有兩個特征峰，代表兩種躍遷過程。質子化構象生色基團通過Tyr66 的脫質子狀和質子化狀态(酚羟基)的轉換決定熒光發射。由于酚的激發态酸性遠大于其基态, 故僅脫質子态的結構發射熒光。這個過程是十分迅速的，因此熒光蛋白發射的是熒光而不是磷光，需要激發光源持續存在才可連續發光。但是其極快的激發響應使得熒光蛋白适合作為高靈敏度生物探針以及生物成像材料。

熒光蛋白GFP發光特性

GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強，特别是在450～490nm藍光波長下更穩定。在熒光顯微鏡下，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素标記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此更适用于定量測定與分析。由于GFP熒光的産生不需要任何外源反應底物，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比拟的。但因為GFP不是酶，熒光信号沒有酶學放大效果，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白，比如熒光蛋白的應用非常的廣泛，已經應用于分子标記，體内示蹤，信号轉導，藥物篩選等生物科研的各個方面熒光讓我們能夠檢測分子的構象變化，也能讓我們追蹤化學反應.... 是科學研究的重要手段之一。

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