土壤中脫氫酶活性測定方法-tft每日頭條

土壤中脫氫酶活性測定方法

生活更新时间:2025-01-23 01:05:44

脫氫酶是一類氧化還原酶，它的作用是催化氫從被氧化的物體(基質AH)中轉移到另一個物體(受氫體B)上:

AH B⇄A BH

已知受氫體可以接受脫氫酶脫出的氫原子，根據接受氫原子的量可以判斷脫氫酶的活性。無色的氯化三苯基四氮唑(TTC，俗稱紅四唑)接受氫後變成紅色的三苯基甲瓒(TF)，根據産生紅色的色度進行比色定量分析，就可以判斷脫氫酶的活性。

土壤中脫氫酶活性測定方法（土壤脫氫酶的測定）1

一、主要儀器和試劑

分光光度計（UV-1800PC，上海美普達儀器有限公司）

電子分析天平（JJ124BC，常州市雙傑測試儀器廠）

離心機（KH20A，湖南凱達科學儀器有限公司）

水浴鍋（HH-6孔，祥達儀器）

0.36%Na2SO3 溶液：稱取0.3657g亞硫酸鈉溶于100ml蒸餾水中；

0.05M Tris-HCl緩沖液(PH=7.6)：稱取三羟甲基氨基甲烷，加1.0MHCl 20毫升，蒸餾水定容至1L；

0.4%TTC（氯化三苯基四氮唑）：稱取0.4克TTC溶于100毫升蒸餾水中，每周新配；

Na2S2O4，甲醛，丙酮（分析純）

二、操作步驟

1. 标準曲線的繪制

（1）按下表配置系列濃度的TTC标準溶液。

土壤中脫氫酶活性測定方法（土壤脫氫酶的測定）2

（2）顯色

用藥匙向每隻比色管中各加入少許連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)，混勻，使TTC全部還原為紅色的TF。用1~5ml移液槍向各管滴加1ml甲醛終止反應，搖勻後再加入2ml丙酮震蕩搖勻，37℃水浴10min。

（3）測定吸光度，繪制标準曲線。

在485nm波長下測定各管溶液的吸光度A，并以A為縱坐标，TTC濃度為橫坐标，繪制出TTC标準曲線。

2.壤脫氫酶活性的測定

（1）培養并顯色

首先，按下表向四支離心管中分别加入以下物質

土壤中脫氫酶活性測定方法（土壤脫氫酶的測定）3

然後将以上四支離心管避光，37℃保溫培養24h。

（2）培養結束後，用1~5ml可調試移液槍向各管分别加入1ml甲醛終止反應；再分别加入2ml丙酮震蕩并于37℃下水浴保溫10min。

（3）離心；将各離心管置于離心機中，4000r/min離心5min。

（4）測吸光度；取上清液在485nm波長下測定吸光度A，在标準曲線上查出相應的TTC濃度。

3.土壤脫氫酶活性的計算

脫氫酶活性（ug/g土/24h）=A×B×C

式中：

A為标準曲線中查的TTC濃度（μg/ml）；

B為培養時間的校正值（h）；

C為比色時的稀釋倍數.

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