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Mid-Autumn Festival

前陣子小薇通過分享文獻介紹實驗設計思路時，

收到不少小夥伴的問題反饋，例如：

不同蛋白表達的方法對樣本有要求嗎？

研究某個蛋白的功能時，需要先檢測蛋白的定位，檢測蛋白定位方法都有哪些呢，該如何選擇？

哪種蛋白檢測定量最準确？

鑒于上述問題，小薇今天特意給大家分享幾種常見的蛋白檢測技術的應用，希望對大家有所幫助。

蛋白免疫印迹（Western blot）

Western blot是最常用的經典蛋白分析技術。它是根據抗原抗體的特異性結合檢測樣品中蛋白表達的方法。Western blot檢測先要進行SDS-PAGE，然後将分離開的蛋白質樣品用電轉儀轉移到固相載體上後，再利用抗原-抗體-标記物顯色來檢測樣品。

樣品：細胞、蛋白。

應用：定性和半定量分析。可用于檢測多種類型的蛋白，例如核蛋白，細胞質蛋白，分泌蛋白等，通過觀察印迹條帶有無反應蛋白的表達情況，進而對蛋白表達與否進行定性判斷；而且還可以通過Image J等軟件對蛋白條帶進行灰度分析，進而對蛋白進行半定量分析。（各位客官可移步之前的公衆号文章看看如何灰度分析——ImageJ驚豔登場！分分鐘搞定WB條帶灰度分析（内含免費軟件包））

免疫組化（IHC）

IHC融合了組織學技術（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等）和免疫學原理（抗原抗體特異性結合）。利用标記抗體經抗原抗體特異性免疫反應和化學/熒光呈色反應，對組織或細胞内的抗原進行研究。

樣品：細胞或組織。

應用：定位、定性和半定量分析。定位是IHC最大的優勢，該方法可在組織和細胞中進行抗原的準确定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，因此可以進行形态與功能相結合的研究。該方法要在顯微鏡下觀察結果，可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。根據呈色有無反應蛋白的表達情況，進而對蛋白與否進行直觀上的定性判斷。通過對呈色區域的灰度值或面積分析，進而對蛋白進行半定量分析。（各位客官可移步之前的公衆号文章看看如何進行半定量分析——SCI福利來襲！ImageJ做免疫組化定量分析，教程和插件你都值得擁有）

3、酶聯免疫吸附測定（ELISA）

ELISA是一種固相酶免疫測定方法，用到了免疫學原理和化學反應顯色。該方法是将已知抗原或抗體吸附在固相載體上，将酶标記于抗體或抗原。然後抗原抗體及酶結合物在固相載體上進行反應，在底物參與下檢測顯色反應的程度，從而對抗原或抗體進行分析。

樣品：多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液。

應用：精準定量。采用已知濃度的标準品做标準曲線就可以做到絕對定量，靈敏的ELISA可以達到pg級别的蛋白檢測。

總結

• Western blot是經典的蛋白半定量技術，定量比IHC更加準确；可通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分别檢測其中抗原含量，間接反映蛋白的定位，但敏感性遠遠低于IHC。
• IHC定位性比較強，是定位檢測首選方法，尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。
• ELISA方法定量最準确，一般是使用血清或者組織磨碎液，是分泌性蛋白檢測首選方法之一。可以微定量分析多個樣本，結果精确。

以上就是今天分享的全部内容了，看完是不是對蛋白檢測方法的選擇有了清晰的思路，如果看完有收獲的話，辛苦轉發或點個贊呗。

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