檢測蛋白質的方法有哪些?凱氏定氮法凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品将有機氮都轉變成無機铵鹽，然後在堿性條件下将铵鹽轉化為氨，随水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收，再以标準鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量，現在小編就來說說關于檢測蛋白質的方法有哪些?下面内容希望能幫助到你，我們來一起看看吧!

檢測蛋白質的方法有哪些

凱氏定氮法

凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品将有機氮都轉變成無機铵鹽，然後在堿性條件下将铵鹽轉化為氨，随水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收，再以标準鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。

由于蛋白質含氮量比較恒定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

雙縮脲法

雙縮脲法是一個用于鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個堿性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。

當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

酚試劑法

取6支試管分别标号，前5支試管分别加入不同濃度的标準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加标準蛋白溶液，在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，于650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

紫外吸收法

大多數蛋白質在280nm波長處有特征的最大吸收，這是由于蛋白質中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用于測定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

取9支試管分别标号，前8支試管分别加入不同濃度的标準蛋白溶液，1号試管不加标準蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加标準蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一緻，将液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。

考馬斯亮藍法

考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恒定的情況下，當溶液中的蛋白質濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉變有一定的數量關系。

一般情況，當溶液中的蛋白質濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。

更多精彩资讯请关注tft每日頭條，我们将持续为您更新最新资讯!