轉眼 又是一年開學季，還記得那些年，我們開學的日子嗎？從小時候得不想去學校，到中學時開學前的惡補作業，再到現在我們在實驗室為了我們的各項實驗數據通宵達旦，各位科研人，你們準備好了，你們的細胞準備好了嗎？

開學季也是細胞們的複蘇季，如果你對于細胞複蘇還沒有做到胸有成竹的話，快收藏這篇文章，在每一次複蘇前都溫習一遍吧。

細胞複蘇就像是蛋炒飯一樣，最簡單也最困難，隻要有一步差池，就會導緻細胞受損乃至死亡，從而整個實驗失敗！

細胞複蘇的第一要點就是快速融化，要盡可能快的将細胞從-178℃解凍至37℃，盡可能避免冰晶緩慢融化時進入細胞再形成結晶，對細胞造成損傷。

具體操作流程共有八個步驟：

①　操作準備

1) 将無菌超純水加熱至37℃保存在無菌玻璃瓶中備用；

2) 細胞實驗室預先常規消殺，用紫外線照射30min以上，并用75%酒精擦拭超淨台以及各類器材，保證操作環境無菌；

3) 将各類需要使用的槍頭、離心管、培養瓶以及廢液缸等高溫高壓滅菌後有序擺放在超淨台桌面。

②　細胞轉移

1) 根據細胞凍存時保存的編号确定細胞存放的位置；

2) 穿好防護設備後将細胞從液氮中取出，核對細胞編号；

3) 将細胞迅速轉移至操作空間，如步行距離超過1min，需準備幹冰運輸。

③　細胞解凍

1) 迅速将細胞凍存管投入37℃的無菌超純水中快速搖晃解凍；

2) 解凍1-2min後等液體完全溶解後，用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再放入超淨台内。

④　離心清洗

1) 将細胞溶液加入完全培養基完全吹打混合後平衡；

2) 将離心管以3000r/min，離心3min，重複清洗兩次去除DMSO。

⑤　懸液制作

1) 将上清液棄去後重新加入10ml完全培養基；

2) 通過移液槍完全吹打混合後制成細胞懸液。

⑥　計數觀察

1) 取适量懸液進行染色計數，計算細胞活力、活率；

2) 顯微鏡下觀察細胞，确定細胞具體複蘇情況

3) 細胞濃度需保持在5*105為适宜。

⑦　培養細胞

1) 将觀察過後适宜培養的細胞分裝在各個培養瓶中；

2) 将各個培養瓶标記後放入37℃，5%CO2培養箱内24-48h後換液或傳代。

⑧　記錄時間

1) 将培養瓶中的細胞記錄時間，方便之後換液傳代記錄。

細胞複蘇小貼士TIPS:

1. 操作液氮時需要做好完全防護措施，避免直接接觸到液氮造成傷害。

2. 取出凍存管後需要檢查是否密封，如果密封不完全會導緻液氮進入管内解凍時出現炸管情況。

3. DMSO在常溫下會對細胞産生毒性，解凍要迅速，解凍後需要盡快加入少許培養基稀釋後離心。

4. 每次移液後需要更換槍頭，避免造成溶液交叉污染。

5. 解凍前後的培養基血清需要保持一緻，如有更換需要進行梯度更換。

判斷細胞複蘇的成功的關鍵，就是看細胞複蘇後的存活率以及之後的生長情況，以貼壁細胞為例，複蘇後細胞貼壁率能達到95%以上，就說明細胞活性好，複蘇操作流程達标。

相信大家有了本文的學習與鞏固，一定能更快的成為一名合格的細胞培育達人！

更多精彩资讯请关注tft每日頭條，我们将持续为您更新最新资讯!