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設計引物時不必要注意的是

圖文 更新时间:2024-09-16 08:15:32

設計引物時不必要注意的是?實際的引物設計操作中,如果按照以上所有條款來設計引物,就等着老闆來抽你吧PP5是最好的引物設計軟件?錯了,PP5隻是最好的引物驗證軟件,用它來設計引物就完蛋了,連Tm值都算不準,今天小編就來聊一聊關于設計引物時不必要注意的是?接下來我們就一起去研究一下吧!

設計引物時不必要注意的是(見鬼去吧引物設計原則)1

設計引物時不必要注意的是

實際的引物設計操作中,如果按照以上所有條款來設計引物,就等着老闆來抽你吧。PP5是最好的引物設計軟件?錯了,PP5隻是最好的引物驗證軟件,用它來設計引物就完蛋了,連Tm值都算不準。

下面來教你怎麼設計qPCR引物吧,首先花1分鐘找到基因的轉錄本序列。NCBI上找,如果遇到多轉錄本,可先用DNA STAR的MegAlign來進行比對,僅選取重合部分,這樣就能擴增出所有轉錄本了。同時注意,僅選取3`末端序列,由于Oligo dT是從PolyA開始反轉錄的,所以如果片段較長的話,反轉錄酶可能無法把5`端序列全部給反轉成cDNA。

好了,有了序列就要找引物了。不要用PP5了,太老了不好用,且PP5不能兼容Win7的系統。現在推薦你們兩款軟件,都是超贊的,PP6和AelleID6.0/BD 7.0,有這個在手,基本上就是傻瓜型的操作了。隻要會輸入序列,就能找到引物了,對引物會有具體的評分,Best、Good、Poor、Not Found,選取Best導出即可,如果是Poor或者Not Found,就調整一下參數如Tm值或引物長度,一般來說都是沒問題的。

引物搜索,注意調整産物長度,Tm值及搜索範圍。

來源:實驗萬事屋

【科研收錄,版權歸原作者所有】

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