• 雞毒/滑液型支原體抗體檢測試劑盒

• 移液器

• 量筒

• 試管

• 96孔稀釋闆

• 雙蒸水或去離子水

• 酶标儀

• 洗闆機

A、血清：用樣品稀釋液作兩次1：10（10μl血清 90μl樣品稀釋液）稀釋，最終稀釋100倍；如第二步稀釋在血清闆上進行，可适當增加，例如12μl血清 108μl樣品稀釋液

B、陽性血清：對照在離心管裡加300μl樣品稀釋液，再加3μl陽性對照充分混勻；

C、陰性血清：對照在離心管裡加300μl樣品稀釋液，再加3μl陰性對照充分混勻；

D、洗滌液：用20ml洗滌液加380ml蒸餾水或去離子水，混勻；

E、酶标記物：100μl酶标記物加10ml樣品稀釋液，混勻；

F、終止液：2.5ml終止液加10ml實驗室級水混勻（注意：5倍終止液冷藏保存時可能會産生白色固體，這并不影響産品質量。可以在室溫或37°C下溶解後使用）。

A、事先畫好表格并标記待檢樣品和陰、陽性對照的位置，取出一塊酶标闆，相應做好标記；

B、将稀釋好的陽性對照加入A1、B1孔，100ul/孔；

C、将稀釋好的陰性對照加入C1、D1孔，100ul/孔；

D、将稀釋好的待檢樣品加入到相應孔内，100ul/孔；

E、室溫孵育30分鐘。

F、倒出孔中液體，每孔加入300μl稀釋好的洗滌液，震蕩，倒出洗液，在吸水紙上拍闆，

确保無殘留。重複以上步驟，總共洗闆3-4遍。

G、每孔加入100μl稀釋好的酶标記物。

H、室溫孵育30分鐘；

I、倒出孔中液體，同f洗滌。

J、每孔加入100μl底物。

K、室溫孵育15分鐘。

L、每孔加入100μl稀釋好的終止液。

M、用酶标儀在405-410nm波長下讀闆。

實驗的有效性

隻有當陰性對照算術平均值小于0.200，陽性減去陰性所得的矯正值在0.250-1.200之間，陽性對照本身OD在0.35-1.20之間，測定結果才有效；如果三者中任何一個不在範圍内，則測定結果無效，需重新檢測。如果待檢樣品的SP值小于0.600，則視其抗體滴度為0，或者沒有MG/MS抗體的反應。

結果的計算

a）陽性平均值（PCX）=（A1 B1）/2

b）陰性平均值（NCX）=（C1 D1）/2

c）S/P值：S/P=（樣品OD值-NCX）/（PCX-NCX）

d）抗體滴度的換算關系：Log10滴度=（1.464×log10SP） 3.197

結果分析

SP臨界值：辛百克斯每種ELISA檢測試劑盒都有一個與陽性血清對照對應的SP臨界值，用這個SP臨界值可以很清楚地去區分陽性樣品與陰性樣品，MG/MSELISA檢測試劑盒的SP臨值如下：

• 好的實驗結果必須遵守實驗操作規則，使用好的安全實驗技術；

• 所有試劑和樣品都要視為生物安全材料處理；

• 試劑盒中的試劑如果已經過期，不要使用；

• 使用過的洗液，對照血清，檢測闆，檢測樣品和其它檢測試劑必須用漂白劑或強氧化劑作無害化處理；

• 所有試劑不要被血清和細菌污染；

• 每塊酶标闆都有濕度顯示，如果顯示出粉紅色，闆則需清理（漂白劑清洗）或無害化處理；

• 謹防試劑濺入眼睛和皮膚，一旦濺入，立即用涼水沖洗幹淨；

• 不要用嘴對着吸管吸取試劑瓶内的試劑。

• 試劑盒内所有組份需在2-8°C保存；在開始實驗前，所有的檢測試劑必須回溫至室溫（21°C-24°C）！室溫高可能導緻OD值偏高室溫低可能導緻結果不成立。

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