知其然知其所以然,在了解整個IP過程中的很多原理後,才能從本質上對實驗的條件摸索進行優化,據此,下面整理了一些IP過程中應該注意的事項。
一、樣本樣本是這個實驗最為重要的因素,所以樣本是否能處理好尤為關鍵,這決定了抗原抗體反應總的抗原質量,濃度以及抗原是否處于三級折疊的天然構象。所以在處理的時候,要去在冰上進行,包括離心機要調整至4度。
另外最關鍵的是裂解液的配置,合适的裂解液要使得所要提取的目的蛋白充分釋放,另外還要保證免疫沉澱過程中抗原抗體以最适合的濃度進行結合,一般裂解蛋白的濃度為1ml對應10cm dish的細胞。
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