關于血清的一些讨論

　　1、血清的主要成分和功能

　　牛血清在細胞培養中對細胞的生長增殖具有重要甚至是難以替代的作用，它含有豐富的細胞生長必須的營養成分。主要有以下成分和功能：

　　A、血清中的主要物質―蛋白質如白蛋白等具有緩沖細胞培養液酸堿度、維持滲透壓的作用。

　　B、轉鐵蛋白、甲狀腺素結合蛋白等結合蛋白，有識别維生素、脂類、金屬和其它激素等，并能與有毒金屬和熱原質結合，從而起到解毒作用。

　　C、纖維粘連素、胎牛血清中的胎球蛋白、貼壁因子等能促進細胞貼壁、鋪展。

　　D、多肽類如血小闆促生長因子、成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子、胰島素、類胰島素生長因子、促生長激素、氫化可的松等能支持細胞分裂增殖并維持細胞對數生長。

　　E、2巨球蛋白等蛋白酶抑制劑能抑制蛋白酶，保護細胞不受損害。

　　F、血清中還含有豐富的氨基酸、葡萄糖、酮酸及與蛋白相結合狀态的微量元素等，對細胞培養均有意義。

　　正因為血清具有如此複雜的成分和重要的功能，所以血清的保存和使用顯得非常重要。

　　2、保存血清的最好方法：

　　我們建議血清應保存在-15℃至-20℃，有效期為5年，若存放于4℃時，請勿超過四周，若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器内，再放回冷凍。不宜反複凍融。配制成完全培養基後應在四周内用完。

　　3、血清解凍後有絮狀沉澱物出現，該如何處理：

　　血清中沉澱物的出現有許多種原因，最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍後也會存在于血清中，也是造成沉澱物的主要原因之一，但這些絮狀沉澱物并不影響血清本身的質量，若您欲除去這些沉澱，可以将血清分裝至無菌離心管内，以400g稍微離心，上清液即可接着加入培養基内一起過濾。我們不建議您以直接過濾的方式去除這些沉澱物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。

　　4、如何解凍血清才不會使血清質量受損：

　　我們建議您将血清從冷藏箱取出後，先置于2～8℃冰箱使之融解，然後在室溫下使之全融，但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。

　　5、為什麼要熱滅活血清：

　　加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小闆釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦您使用熱滅活血清。

　　6、有必要做熱滅活嗎：

　　實驗顯示，經過正确處理的熱滅活血清，對大多數細胞而言是不需要的，經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活處理的血清，沉澱物的形成會顯著的增多，這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察，類似于“小黑點”形狀，這常常會讓研究者誤認為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉澱物增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您，若非必須，您可以不需要做熱滅活處理，如此一來，不但節省您寶貴的時間，更确保血清的質量！

　　7、如何避免沉澱物的産生：

　　我們建議您在使用血清的時候，注意下列操作：

　　A、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-20℃至4℃至室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如-20℃至37℃），實驗顯示非常容易産生沉澱物。

　　B、解凍血清時，請随時将之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉澱的發生。

　　C、請勿将血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，從而影響血清質量。

　　D、血清的熱滅活非常容易造成沉澱物的增多，若非必要，可無須做此步驟，若必須做血清的熱滅活，請嚴格遵守56℃，30分鐘的原則，并且随時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉澱物的增多。

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