高效液相色譜法通常是根據固定相和流動相的性質來分類的，因此，有必要再讨論一下液相色譜法中所使用的固定相和流動相的一般特性。
固定相 高效液相索賠法所用的固定相按所承受的壓力可分為硬膠、半硬膠或軟膠三種。固定相的選擇在很大程度上取決于所要用的液相色譜方法，在液-固吸附色譜法、液-液分配色譜、化學鍵合相色譜法中多使用硬膠固定相，離子交換色譜中常常使用半硬膠，而在凝膠色譜中，硬膠、半硬膠和軟膠固定相都可以使用。
固定相按孔隙深度又可以分為表面多孔型和全多孔型。表面多孔型的基體是球形玻璃珠，在玻璃表面塗一層多孔活性物質，如矽膠、氧化鋁、聚酰胺、離子交換樹脂、分子篩等，也可以支撐化學鍵合固定相，這種固定相的多孔層薄、孔淺、傳質速度快，适合于快速分離，填充均勻緊密，機械強度高，能承受高壓，适合于簡單的樣品及常規分析。由于多孔層較薄，進樣量受到限制。全孔型固定相比表面積大，柱容量大；小顆粒全多孔型固定相孔洞淺傳質速度快，柱效高，分離效果好，适合于複雜樣品和痕量組分的分離分析，這類固定相在高效液相色譜法中應用最為廣泛。
流動相 在氣相色譜中，可供選擇的載氣隻有三種，它們的性質相差也不大，所以要提高柱的選擇性，主要是改變固定相的性質。在液相色譜中，與氣相色譜不同，當固定相選定時，流動相的種類、配比能顯著地影響分離效果，因此流動相的選擇很重要，當色譜柱和待測樣品确定後，選擇什麼樣的溶劑做流動相，直接影響組分的分離度。通常要考慮做為待測流動相的溶劑的物理性質和溶劑強度以及溶劑的種類和配比。
選擇流動相時應注意以下幾個影響因素
1、有足夠的溶解能力 對待測樣品要有适宜的溶解度，否則，在柱頭處易産生沉澱。
2、與檢測器要匹配 選擇溶劑時，需要考慮溶劑的物理性質對檢測結果的影響。
3、純度要高 若溶劑純度較低，長期積累雜質而導緻檢測器噪聲增加，柱效下降，通常采用分析純溶劑，必要時可采用蒸餾等預處理方法進行進一步的純化。
4、黏度要低 溶劑黏度低，有利于分離。
5、使用前需脫氣 由于柱前和柱後壓力相差較大，溶解在溶劑中的氣體将以氣泡形式逸出，幹擾高壓泵和檢測器正常工作，因此常采用加熱回流、抽真空脫氣、超聲波處理等方法對溶劑進行預先脫氣處理。
6、避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑。
高效液相色譜儀工作原理
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2023-07-19
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