慶應三年十一月,末代幕府将軍德川慶喜實行大政奉還。不久新政府和幕府之間展開戊辰戰争,新選組站在幕府一方參與1868年初的鳥羽伏見之戰,被新政府軍擊敗。新選組屢敗屢戰,甲州勝沼之戰後,新選組返回江戶,部份隊員在這時離隊。近藤勇被新政府軍捕獲處死,沖田總司也因肺結核而病逝。新選組其後參與宇都宮城之戰和會津戰争,齋藤一在會津戰争其間離隊。土方歲三與部份隊員跟随其他擁護幕府的軍隊退到北海道,成立蝦夷共和國及參與箱館戰争。明治二年(1869年)五月,土方與明治政府軍作戰時中彈身亡,相馬主計接任,與國也随著總統榎本武揚的投降而滅亡。主要是曆史大勢所趨啦,隻因新選組是站在幕府一方,戊辰戰争倒幕派最後取得勝利,才有後來的近代日本轉折點明治維新。
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