蛋白質是細胞中最重要的含氮生物大分子之一，承擔着各種生物功能。蛋白質的定量分析是蛋白質構造分析的基礎。目前常用的蛋白測量的方法主要有BCA法、考馬斯亮藍法(Bradford)和Lowry法等。

BCA法

原理

在堿性環境下蛋白質與Cu2 絡合并将Cu2 還原成Cu1 (biuret reaction)。BCA與Cu1 結合形成穩定的紫藍色複合物，在562nm處有高的光吸收值并與蛋白質濃度成正比，據此可測定蛋白質濃度。

實驗步驟

1.按試劑盒說明書配置BCA工作液；2.完全溶解蛋白質标準品，加到96孔闆的蛋白标準品孔中，按照說明書要求對标品進行梯度稀釋，加入BCA工作液，用酶标儀測定其吸光度；3.以樣品濃度為X軸，吸光度為Y軸，繪制标準曲線；4.待測樣品中加入BCA工作液，測定吸光度，帶入标準曲線中，計算樣品濃度。與Lowery法相比，BCA蛋白測定方法靈敏度高，操作簡單，試劑及其形成的顔色複合物穩定性俱佳，并且受幹擾物質影響小。與Bradford法相比，BCA法的顯著優點是不受去垢劑的影響。

考馬斯亮藍法(Bradford)法

原理

考馬斯亮藍G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質含量屬于染料結合法的一種。在遊離狀态下呈紅色，最大光吸收在488nm;當它與蛋白質結合後變為青色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定，是一種常用的微量蛋白質快速測定方法。

實驗步驟

1.按試劑盒說明書配置Bradford染液；2.完全溶解蛋白質标準品，加到96孔闆的蛋白标準品孔中，按照說明書要求對标品進行梯度稀釋，加入染液和染料結合液後，用酶标儀測定其吸光度；3.以标品濃度為X軸，吸光度為Y軸，繪制标準曲線；4.各孔中加入染液和染料結合液，測定樣品吸光度，帶入标準曲線中，計算樣品濃度。Bradford法試劑配制簡單，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質含量，測定蛋白質濃度範圍為0～1 000μg/mL，最小可測2.5μg/mL蛋白質。

斐林—酚試劑(Lowry)法

原理

斐林(Folin)-酚試劑法結合了雙縮脲試劑和酚試劑與蛋白質的反應，其中包括兩步反應：第一步是在堿性條件下，與銅試劑作用生成蛋白質-銅絡合物;第二步是此絡合物将磷钼酸、磷鎢酸試劑還原，生成磷钼藍和磷鎢藍的深藍色混合物，顔色深淺與蛋白含量成正相關，在650nm波長下有最大光吸收。

實驗步驟

與上述兩種方法大緻相同

LORRY法靈敏度高,重複性好，适于5～l00μg蛋白質的定量，耗時長，操作要嚴格計時，在實驗中要特别注意排除還原物質、檸檬酸等的幹擾作用才能得到最準确的實驗結果。

這幾種方法共同點在于，都需要繪制标準曲線，而标準曲線及待測樣品往往數量較多，為了縮短實驗耗時，保證測量準确性，可使用酶标儀對吸光度進行測定。

AMR-100酶标儀

AMR-100酶标儀是一款基于濾光片的高品質光吸收酶标儀，波長範圍340nm~750nm，适合科研和臨床的應用。适用96孔闆，可滿足不同通量的要求。7英寸觸屏液晶顯示，易于使用，不需操作鍵盤，數據和程序可保存在儀器内，或者通過U盤導出。讀闆速度快，能實現快速測量，提供準确性高，重現性好的測量結果。是實驗室酶标儀的理想選擇。

性能指标

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