如何正确的進行elisa檢測-tft每日頭條

如何正确的進行elisa檢測

圖文更新时间:2024-10-05 06:16:19

ELISA是一個非常嚴謹、極其考驗操作者技巧和經驗的實驗，檢測結果數值低、标準曲線梯度差、背景值高、變異系數大等諸多問題也是兵家常事。

我們将常見的ELISA實驗結果OD值偏低的原因及對策進行了彙總，快來看看有沒有解答你現在遇到的問題呢！

整體OD值偏低或無信号

可能原因	相應對策
● 試劑盒組分失活	使用新的試劑盒，按照說明書要求保存試劑盒
● 試劑盒組分未平衡	試劑盒每個組分都需要平衡至室溫後進行實驗
● 試劑混用或混合不充分	保證使用試劑盒内完整一套試劑進行實驗，保證溶液充分混合
● 洗液被污染	配制新的洗液
● 洗滌液浸泡時間過久或洗闆次數過多	按照說明書的要求進行操作
● 孵育時間不充分	保證充足的孵育時間
● 孵育溫度不穩定	檢查恒溫箱，确保孵育溫度穩定
● 生物素化抗體或HRP酶結合物不足	保證濃縮液取量準确且稀釋完全
● 生物素化抗體或酶結合物稀釋不正确或步驟颠倒	按照說明書的步驟和要求進行操作
● 未加終止液	反應結束時，确保每孔加入終止液終止反應
● 終止後未及時讀闆	終止液終止反應後需要在10min内進行讀闆操作
● 酶标儀設置錯誤	在酶标儀上檢查波長和濾光片設置

标曲OD偏低但樣本OD值正常

可能原因	相應對策
● 标準品部分降解	按照說明書推薦方式保存标準品。開封後的标準品應以最高濃度用EP管分裝凍存，保存于-20℃，半個月内使用有效
● 标準品複溶不當	打開前将标準品短暫離心，檢查複溶後是否有未溶解的物質
● 标準品稀釋不正确	按照說明書要求，保證按正确倍比梯度稀釋

标曲線性佳但樣本OD值偏低

可能原因	相應對策
● 基質效應	稀釋樣本可以降低基質效應
● 鈎狀效應	預估樣本濃度選擇合适的稀釋倍數，并通過預實驗選擇最佳稀釋倍數
● 靶蛋白豐度不足	重複實驗，濃縮樣本或選用靈敏度更高的試劑盒
● 樣本處理或保存不當	确保正确采集與保存樣本，避免反複凍融
● 樣本類型不适用	檢測的樣本類型不分泌檢測的因子、不是均質澄清溶液（高脂/粘稠溶劑）、重組蛋白不能匹配抗體。應選擇與檢測樣本類型相匹配的ELISA試劑盒

以上，分享給大家的常見ELISA實驗結果OD值偏低的原因及對策，更多問題歡迎大家在評論區留言補充。

如何正确的進行elisa檢測（ELISA實驗常見問題二）1

Elabscience®ELISA試劑盒特點：

❖ 産品數量多：1300 ELISA試劑盒，涉及10多個研究領域。

❖ 種屬範圍廣：包含人、小鼠、大鼠、兔、猴、豬等

❖ 規格種類多：48T/96T/96T*5

❖ 套裝完整性：包含實驗所需整套試劑，方便使用

❖ 高精密度：批内、批間CV<10%

❖ 良好回收率：80%~120%

❖ 高靈敏度：pg級

❖ 高特異性：交叉反應率<10%

❖ 文獻支持：SCI文獻引用約8000篇

❖貨期短：大量現貨，2-3個工作日内發貨

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如何正确的進行elisa檢測（ELISA實驗常見問題二）2

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