微生物檢驗的基本方法?問、滅菌鍋化學檢驗和生物檢驗是每次實驗都需要做嗎？還是定期檢驗一下滅菌鍋的性能呢？ 答：化學法是每次都要做的，生物法可以定期做，根據滅菌鍋的使用頻率，每周、每半月或每月做一次即可，下面我們就來說一說關于微生物檢驗的基本方法?我們一起去了解并探讨一下這個問題吧!

微生物檢驗的基本方法

問、滅菌鍋化學檢驗和生物檢驗是每次實驗都需要做嗎？還是定期檢驗一下滅菌鍋的性能呢？ 答：化學法是每次都要做的，生物法可以定期做，根據滅菌鍋的使用頻率，每周、每半月或每月做一次即可。

問：沙氏葡萄糖瓊脂培養基（SDA）上會不會生長細菌？ 答：SDA不是選擇性培養基，而是一種廣譜的增菌培養基，pH範圍5.4-5.8，某些細菌是可以在SDA上生長的，黴菌和酵母菌總數計數時SDA上生長的菌均應計入黴菌和酵母菌總數；或者可以經過評估選擇含有抗生素（如氯黴素）的SDA或者玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行黴菌和酵母菌總數計數。

問：瓊脂培養基為什麼需要倒置培養？ 答：在進行微生物培養時，若正置培養，瓊脂培養基中的水分易蒸發使平闆幹裂，不利于微生物的生長；同時水蒸汽會在平皿蓋上形成冷凝水，若回落在培養基表面，會使菌落蔓延生長，無法計數，若冷凝水太多會使培養基與平皿分離，容易滑動倒置培養可減少培養基表面的空氣流動，減慢培養基中水分蒸發的速度，充分維持彈性，有利于菌株的生長和繁殖，防止空氣中雜菌對培養基及培養物造成污染；也會由于重力作用在一定程度上使營養物質沉積到培養基表面，有利于微生物利用營養物質；倒置的平闆方便拿取，避免環境中雜菌的污染。需要注意的是，《食品安全國家标準 食品微生物學檢驗黴菌和酵母計數》（GB4789.15-2016）是要求正置培養，而非倒置，以防黴菌孢子形成次生菌落，影響計數結果。

問：食品企業的環境檢測應該依據那個标準？答：GB/T16294-2010《醫藥工業潔淨室(區)懸浮粒子、浮遊菌和沉降菌的測試方法》都有規定，可以做為參考。

問：請問高壓滅菌鍋需要操作人員有壓力容器操作證嗎?有些人說屬于《特種設備安全監察條例》需要操作證？答：CNAS-CL 01-A001: 2018的 6.2.2.2條款裡有說講到，如實驗室使用的高壓蒸汽滅菌器不屬于簡單壓力容器(定義參見TSG R0003 -2007《簡單壓力容器安全技術監察規程》)時，操作人員需持有特種作業人員證。

問：一些不常用的培養基開瓶後在效期内較長時間沒有用完，那麼這些開瓶後的培養基需要進行複驗嗎？答：開瓶後的培養基，如果長時間不使用，還在效期内，建議開瓶後間隔1年進行複驗。如果出現結塊，則不能使用。同理，如果同一批次一次購買量較多，一年内未使用完，也建議進行複檢。

問：控制菌檢查法中用到的培養基，在做培養基适用性的時候，其中有“指示特性”的表述，那麼“指示特性”是指的什麼意思？答：培養基指示特性包括菌落大小、形态特征、指示劑反應情況（菌落顔色變化）等。例如大腸埃希氏菌在麥康凱瓊脂培養基上桃紅色菌落有沉澱環、乙型副傷寒沙門菌在XLD有黑心等。

問：什麼是不可接受微生物？答：不可接受微生物通常是指那些已知有明顯緻病性的，存在足夠的數量，通過産品的給藥途徑可能導緻患者不可接受風險的微生物。如何确定一種微生物是不可接受的，需要進行風險分析，包括微生物負載量、微生物特性、産品特性、給藥途徑、對患者潛在影響等。

問： 培養基滅菌沒有按照廠家提供的滅菌參數進行，是否可行？答：可以。廠家産品說明書提供的滅菌參數可作為參考使用，使用單位也可以根據自己實驗室的實際情況，在相關法規要求内，使用自己驗證過的滅菌參數來執行。【法規來源：中國藥典2020版9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則 ……培養基滅菌應按照生産商提供或使用者驗證的參數進行……】

問：革蘭氏染色有哪些注意事項？

答：（1）最好挑選18-24h的菌落進行革蘭氏染色,培養時間過久的的革蘭氏陽性細菌可能會被染成紅色而造成假陰性。

（2）挑取适量的菌，不宜過多,均勻塗開。

（3乙醇脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵,15-30s為宜，脫色不夠可能會造成假陽性,脫色過度可能會造成假陰性。

問：如何根據實驗需要制備斜面？

答：根據實驗需求，擺放斜面一般有三種形式：

（1）長斜面：斜面底部剛覆蓋試管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA傳代斜面。

（2）高層斜面：斜面與底層高度約為2:3，即底部高約3cm，斜面長度約2cm；如三糖鐵高層斜面。

（3）普通斜面：斜面底部距試管底部約1cm，上部距管口約2.5-3cm。

問：三糖鐵培養基顔色變化原理是什麼？

答：該培養基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，隻能利用葡萄糖的細菌，分解葡萄糖産酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養基中含氮物質，生成堿性産物，故使斜面後來又變紅，底部由于是在厭氧狀态下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發酵乳糖的細菌則産生大量的酸，使整個培養基呈現黃色。如菌種接至培養基培養後産生黑色沉澱，是因為某些細菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氫，硫化氫和培養基中的鐵鹽反應，生成黑色的硫化亞鐵沉澱。

問：如果三糖鐵上斜面紅色、底層黃色，中間有黑色且産氣，能否判定為沙門菌？答：不能。某些非沙門菌也能在三糖鐵上呈現和沙門菌一樣的顔色變化，例如奇異變形杆菌。如三糖鐵上有上述顔色變化，需要進一步的進行适宜的鑒定試驗，确證是否為沙門菌。如果采用傳統的生化鑒定，可參考GB 4789.4-2016中沙門氏菌檢驗的方法。

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