定量分析是在定性分析的基礎上,需要純物質作為标準樣品。液相色譜的定量是相對的定量方法,即:由已知的标準樣品推算出被測樣品的量。
液相色譜法定量的依據
被測組分的量(W)與響應值(A)成正比,W=fXA
定量校正因子(f):是定量計算公式的比例常數,其物理意義是單位響應值(峰面積)所代表的被測組分的量。
由已知标準樣品的量和其響應值可以求得定量校正因子。測定未知組分的響應值,通過定量校正因子即可求得該組分的量
定量分析常用術語:
樣品:含有待測物,供色譜分析的溶液。分為标樣和未知樣。
标樣:濃度已知的純品
未知樣:濃度待測的混合物
樣品量:待測樣品的原始稱樣量
稀釋度:未知樣的稀釋倍數
組分:欲做定量分析的色譜峰,即含量未知的被測物
組分的量:被測物質的含量
積分:由計算機對色譜峰進行的峰面積測量的計算過程
校正曲線:組分含量對響應值的線性曲線,由已知量的标準物建立,用于測定待測物的未知含量。
常用的定量方法
1、外标法
标準樣品曲線法,分為外标法和内标法。外标法在液相色譜中用的最多。内标法準确但是麻煩,在标準方法中用的最多。
用被測化合物的純品作為标準樣品,配制成一系列的已知濃度的标樣。注入色譜柱得到其響應值(峰面積)。在一定的範圍内,标樣的濃度與響應值之間存在較好的線性關系,即W=fXA,制成标準曲線。在完全相同的條件下,注入未知樣品,得到欲測組分的響應值。根據已知的系數f,即可求出欲測組分的濃度。
外标法的優點:操作、計算簡單,是一種常用的定量方法;無需各組分都被檢出、洗脫;需要标樣;标樣及未知樣品的測定條件要一緻;進樣體積要準确。
外标法的缺點:實驗條件要求高,如檢測器的靈敏度,流速、流動相的組成都不能發生變化;每次進樣體積要有很好的重複性。
2、内标法
操作:将已知量的内标樣加入标準樣中,制成混合标樣,并配制一系列的已知濃度的工作标樣。混合标樣中标樣與内标樣的摩爾比不變。注入色譜柱,以(标樣峰面積/内标樣峰面積)為響應值。根據響應值與工作标樣濃度之間存在的線性關系,即W=f X A,制成标準曲線。将已知量的内标樣加入到未知樣品,注入色譜柱,得到欲測組分的響應值。根據已知的系數f,即可求出欲測組分的濃度。
内标法的特點:操作過程中樣品和内标是混合在一起注入色譜柱的,因此隻要混合溶液中被測組分與内标的量的比值恒定,上樣的體積變化不會影響定量結果。内标法抵消了上樣的體積,乃至流動相、檢測器的影響,因此比外标法精确。
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