實時熒光定量pcr的技術原理-tft每日頭條

實時熒光定量pcr的技術原理

生活更新时间:2025-01-11 13:03:22

實時熒光定量PCR是檢測生物樣品中DNA、RNA含量的最普遍的方法，通過熒光染料或熒光标記的特異性的探針，對PCR産物進行标記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應軟件可以對産物進行分析，計算待測樣品模闆的初始濃度。

實時熒光定量pcr的技術原理（實時熒光定量PCR實驗流程及檢測方法）1

熒光定量PCR原理

通過熒光染料或熒光标記的特異性探針，對PCR産物進行标記跟蹤，通過标準曲線對未知模闆進行定量分析。Real-timePCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信号，對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期，模闆的Ct值和該模闆的起始拷貝數存在線性關系，所以成為定量的依據。

實時熒光定量PCR服務内容

1.從動物細胞、人或動物組織等樣品中提取核酸;

2.對核酸進行濃度及純度分析;

3.熒光定量PCR檢測;

(1)引物和探針的設計與合成;

(2)絕對定量和相對定量的選擇;

(3)探針法和染料法的選擇;

(4)熒光定量PCR儀對目的基因的檢測;

(5)數據統計和分析;

4.預實驗服務：根據客戶提供的目的基因序列或NCBI序列号提供客戶引物和探針，并篩選出優化的引物和探針;

5.正式實驗服務：根據預實驗篩選的引物和探針對所用樣品進行熒光定量PCR的檢測，并對結果進行統計和分析。

實時熒光定量pcr的技術原理（實時熒光定量PCR實驗流程及檢測方法）2

熒光定量PCR檢測方法

1.SYBRGreenⅠ法：

在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鍊後，發射熒光信号，而不摻入鍊中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信号，從而保證熒光信号的增加與PCR産物的增加完全同步。

2.TaqMan探針法：

探針完整時，報告基團發射的熒光信号被淬滅基團吸收;PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信号，即每擴增一條DNA鍊，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信号的累積與PCR産物的形成完全同步。

熒光定量PCR應用

實時熒光定量PCR是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量分析技術。随着分子生物學技術的不斷發展，實時熒光定量PCR技術以其便攜、快速高效、準确靈敏等優勢，越來越受到人們的重視，在環境監測、醫學等領域，生物及食品領域等方面具有重要的應用價值。

定性分析

1.病毒及病原菌檢測

2.物種鑒定

3.基因分型

定量分析

絕對定量的應用

1.病毒及病原菌定量分析

2.導入基因拷貝數解析

3.GMO定量解析

相對定量的應用

1.差異顯示結果驗證

2.基因芯片結果驗證

3.siRNA效果确認

4.mRNA表達量分析

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