GC-MS聯用技術隻适用于分析可以汽化的樣品，難用于極性、熱不穩定、難揮發的生物大分子（如蛋白質、核酸、聚糖等）及極性小分子。液相色譜的應用不受沸點的限制，并能對熱穩定性差的試樣進行分離分析，然而其定性能力弱，與靈敏度高、定性能力強的有機質譜聯用，其意義是顯而易見的。LC-MS聯用需要解決的問題主要兩方面：一是液相色譜流動相對質譜條件的影響以及質譜離子源的溫度對液相色譜分析試樣的影響。二是液相色譜的分析對象主要是難揮發和熱不穩定物質，這與質譜儀常用的離子源要求試樣汽化是不相适應的。

一、LC-MS接口裝置

1、大氣壓電離質譜 樣品在大氣壓條件下電離，然後将離子引入質量分析器進行質譜分析。由于離子化是在室溫下進行，因此不存在試樣的熱解現象。

2、粒子束接口 PB接口由三部分構成：氣溶膠發生器、脫溶劑室及動量分離器。LC流出液以霧化氣體于氣溶膠發生器形成氣溶膠微滴，然後進入加熱的脫溶劑室，在此形成較難蒸發的試樣粒子與溶劑蒸汽，此混合物經脫溶劑室尾噴嘴在動量分離器高真空的作用下，高速噴進動量分離器，分離器的軸向壓力梯度使質量較重的粒子束聚集于噴射氣流的中心而進入質譜的離子源，溶劑蒸汽則被泵抽走。PB接口需要試樣有一定的揮發性，主要用于分析非極性和中等極性化合物。PB接口最主要的優點之一是可得到完好重現的電子轟擊質譜圖，故可利用質譜譜庫進行檢索，定性（結構）鑒定。

二、LC-MS中的串聯質譜法

串聯質譜含有兩個質量分析器。前級質量分析器主要用于分離，在樣品電離後，它隻允許被分析的目标化合物的母離子或特征離子碎片通過。經過碰撞後，由二級質量分析器分析裂解後産生的子離子碎片，從而獲得通過前級質量分析器的組分的質譜圖。串聯質譜法可以分為兩類：空間串聯和實踐串聯。空間串聯是兩個以上的質量分析器聯合使用，兩個分析器間有一個碰撞活化室，目的是将前級質譜儀選定的離子打碎，由後一級質譜儀分析。

三、LC-MS聯用法的實驗技術

1、LC分析條件的選擇 LC分析條件的選擇要考慮兩個因素：使分析樣品得到最佳分離條件并得到最佳電離條件。LC可選擇的條件主要有流動相和組成和流速。在LC和MS聯用的情況下，由于要考慮噴霧霧化和電離，因此，有些溶劑不适合作流動相。不适合的溶劑和緩沖液包括無機酸、不揮發的鹽和表面活性劑。在LC-MS分析中常用的溶劑和緩沖液有水、甲醇、甲酸、乙酸、氫氧化铵和乙酸铵等。對于選定的溶劑體系，通過調整溶劑比例和流量以實現更好的分離。值得注意的是，對于LC分離的最佳流量，往往超過電噴霧允許的最佳流量，此時需要采取柱後分流，以達到好的霧化效果。

質譜條件的選擇主要是為了改善霧化和電離狀況，提高靈敏度。調節霧化器流量和幹燥氣流量可以達到最佳霧化條件，改變噴嘴電壓和透鏡電壓等可以得到最佳靈敏度。在進行LC-MS分析時，樣品可以利用旋轉六通閥通過LC進樣，也可以利用注射泵直接進樣，樣品在電噴霧源或大氣壓化學電離源中被電離，經質譜掃描，由計算機可以采集到總離子流色譜和質譜。

2、LC-MS定性分析 LC-MS可以通過采集質譜得到總離子流色譜圖，由于ESI、APCI等是軟電離源，碎片峰通常少而弱，譜圖中主要是準分子離子，因而隻能提供未知化合物的相對分子質量信息，不能提供結構信息。串聯質譜将準分子離子通過碰撞活化得到其子離子子譜，給出豐富的結構信息，然後解釋子離子譜來推斷結構。如果有标準樣品，利用LC-MS-MS可以自己建立标準樣品的子離子質譜庫，利用庫檢索進行定性分析。利用高分辨質譜儀也可以得到未知化合物的組成式，對定性分析十分有利。

3、LC-MS定量分析 用LC-MS進行定量分析的基本方法與液相色譜法相同。如果僅靠峰面積定量，由于色譜分離方面的問題，會給定量分析造成誤差。因此LC-MS定量分析不采用總離子色譜圖，而是采用與待測組分相對應的特征離子得到的質量色譜圖。此時，不相關的組分将不出峰，就可以減少組分間的互相幹擾，其餘的分析方法同液相色譜定量分析。有時樣品提起十分複雜，即使利用質量色譜圖，仍然有保留時間相同、相對分子質量也相同的幹擾組分存在。為了消除其幹擾，最好的辦法是采用串聯質譜法的多反應檢測技術。這樣得到的色譜圖就進行了三次選擇：LC選擇組分的保留時間，一級MS選擇相對分子質量，第二級MS選擇子離子。這樣得到的色譜圖可以認為不再有任何幹擾。然後，根據色譜峰面積，采用内标法進行定量分析，這是複雜體系中進行微量成分分析常用的方法。

4、樣品預處理 LC常由于樣品預處理不當，導緻樣品信号抑制或共存物的幹擾。在進行分析時，應根據樣品的性質和複雜程度，選擇合适的預處理方法。下面簡述一些常用的方法。

（1）超濾：超濾器根據相對分子質量選擇性保留或通過溶液中的成分。經超濾制備的樣品通常即可進行LC-MS分析。

（2）固相萃取：固相萃取利用小柱選擇性保留使待測成分而使幹擾物質流出，或反之待測成分流出而幹擾物質被小柱保留，從而達到純化樣品的目的。

（3）柱切換：将樣品注入預柱，使待測成分與幹擾物質分離；由切換閥将待測成分轉入分析柱，進行分離分析。柱切換方式有：中心切割、反沖、前沿切割、末端切割。用柱切換技術可在線純化和收集樣品，便于自動化，減少樣品損失，縮短分析時間。

（4）溶劑萃取：用有機溶劑将待測成分萃取至有機相。

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