丁酸梭菌（Clostridium butyricum）又名酪酸梭菌、丁酸梭狀芽孢杆菌，是芽孢杆菌 科、梭菌屬的一種産丁酸、革蘭氏陽性厭氧細菌。 1933年日本千葉醫學院Miyairy博士首次從糞便中分離出了丁酸梭菌，随後發現其培養物中含有少量的脂肪酸，可抑制腸道中有害菌生長并促進有益菌的生長。 丁酸梭菌被廣泛用作人腸炎治療藥物、食品添加劑、獸藥和飼料添加劑。 在韓國和日本，丁酸梭菌早已被用作畜禽飼料添加劑，中國于2009年批準丁酸梭菌為新飼料添加劑。

1 實驗材料

共培養用液體培養基；LB培養基

2 實驗方法

2.1 丁酸梭菌對霍亂沙門氏菌的抑制作用

①霍亂沙門氏菌種子培養

取平闆活化好的菌種轉接到LB液體三角瓶中，裝液量25 mL/100 mL， 37℃，150 r/min培養12-24h，取培養菌液測活菌數和pH值。

②丁酸梭菌單獨培養

取丁酸梭菌菌粉0.1 g接種到裝量為25 mL/30mL的細菌培養瓶中，置于37℃靜止恒溫培養24 h左右。（可按此比例擴大培養體積，最低比例為0.1 g：25 mL）

③丁酸梭菌和霍亂沙門氏菌混合培養

活化好的丁酸梭菌培養液1 mL接種到裝液量為20 mL/30mL的細菌培養瓶中，再把培養好的霍亂沙門氏菌菌液1 mL同時接入該共培養液中， 37℃恒溫靜止培養。對照組為向同樣的共培養液體培養基中（裝液量為20 mL/30 mL）接種霍亂沙門氏菌菌液1 mL，37℃恒溫靜止培養。分别在16和24 h測pH值及沙門氏菌活菌數。

④計數采用平闆塗布法

選擇2～3個适宜梯度稀釋液，吸取100 μL塗布平闆，倒置于嚴格厭氧培養箱或嚴格厭氧培養袋中，37℃培養18～36 h後計數。每個梯度做兩個平行，每個平闆的菌落數在30～300範圍内有效。

2.2 丁酸梭菌對腸出血性大腸杆菌、魏氏梭菌的抑制作用

實驗方法同上，魏氏梭菌種子液為嚴格厭氧，應采用共培養液體培養基。

3 實驗結果

3.1 對霍亂沙門氏菌的抑制結果

丁酸梭菌對霍亂沙門氏菌表現出非常強的抑制作用，24h活菌數從單獨培養時2.0×10⁸CFU/mL減少到1.2×10³CFU/mL。

3.2 對腸出血性大腸杆菌的抑制結果

混合培養16h，腸出血性大腸杆菌活菌數從單獨培養時3.5×10⁸CFU/mL減少到7×10⁶ CFU/mL，24 h活菌數減少到0.4×10⁶ CFU/mL，pH從6.8下降至4.6，呈現良好抑制作用。

3.3 對魏氏梭菌的抑制作用

混合培養後，魏氏梭菌活菌數從單獨培養時的1×10⁸ CFU/mL減少到1×10 ⁵ CFU/mL， pH值從6.8下降到4.5，表現出良好的抑制作用。

4 小結

（1）丁酸梭菌為嚴格厭氧菌，産氫氣。液體培養基中加入厭氧指示劑，粉紅色表明培養基上層有氧；

培養一段時候後液體表面有氣泡，為正常現象。

（2）丁酸梭菌平闆形态如下。

（3）丁酸梭菌對霍亂沙門氏菌、腸出血性大腸杆菌和魏氏梭菌均有顯著的抑制作用，可将腸出血性大腸杆菌和魏氏梭菌細菌含量控制在發病濃度之下，防止發病。尤其是對霍亂沙門氏菌抑制作用更強，可以達到淨化霍亂沙門氏菌的作用。

5、結論

益生菌可以使糖類發酵形成有機酸和短鍊脂肪酸，這些酸能維持酸性環境，降低腸道的 pH 值，防止病原菌及腐敗菌在腸道内異常增殖，減少腸毒素。此外，益生菌還可産生醇、過氧化氫等物質，合成溶菌酶、細菌素和抗菌肽等抗菌物質，達到對緻病菌的抑制作用。故丁酸梭菌可以有效抑制沙門氏菌、大腸杆菌、魏氏梭菌的生長。

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