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紫外-可見分光光度計的類型很多,根據儀器結構可分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計三種,其中單光束分光光度計和雙光束分光光度計屬于單波長分光光度計。1.單光束分光光度計 從光源發出的光經單色器分光後得到一束單色光,通過吸收池後,最後照射在檢測器上始終為一束光,如下圖所示。該類型的分光光度計結構簡單、價格便宜,但由于其雜散光、光源波動等影響很大,所以準确度較差。國産721型、722型、751型等分光光度計都屬于單光束分光光度計。
單光束分光光度計工作流程示意圖
2.雙光束分光光度計 從光源發出的複合光經單色器分光後的單色光被反射鏡(切光器)分為強度相等的兩束光,分别通過參比溶液和樣品溶液,如下圖所示。由于兩束光同時通過參比溶液和樣品溶液,因此能夠自動消除光源強度變化所引起的誤差。雙光束分光光度計一般能自動記錄吸收光譜曲線,其靈敏度較好,但結構較複雜、價格較貴。日本的UV-2450型及我國的UV-2100型、UV-763型等均屬于此類型。
雙光束分光光度計工作流程示意圖
3.雙波長分光光度計 由同一光源發出的光被分成兩束,分别經過兩個單色器,得到兩束不同波長的單色光,再利用切光器使兩束不同波長的單色光以一定頻率交替照射同一溶液,然後再經過光電倍增管和電子控制系統,經過信息處理最後得到兩波長處的吸光度的差值,如圖3-11所示。雙波長分光光度法一定程度地消除了背景幹擾及共存組分的幹擾,提高了分析的靈敏度。雙波長分光光度計不僅可用于多組分混合試樣的分析,還可以用于一般分光光度計不能測定的渾濁試樣(如生物組織液)的分析。
雙波長分光光度計光路示意圖
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