近期，四川新生命幹細胞科技股份有限公司研發團隊（以下簡稱“公司研發團隊”）發明的“一種可用于同種異體回輸的高純度NK體外擴增方法”已向國家知識産權局申請發明專利并獲得受理（以下簡稱“本發明專利方法”），有望在抗擊惡性腫瘤的治療中發揮重要作用。

NK細胞（自然殺傷細胞）作為機體防禦體系的第一道防線，不僅可以在天然免疫系統發揮其主要殺瘤效應，而且在免疫反應的早期還可以分泌不同的細胞因子和各種趨化因子來調節機體的獲得性免疫應答，是機體發揮免疫效應不可或缺的效應細胞。

近年來，NK細胞因其細胞殺傷活性高，起效快，且不受人主要組織相容性複合體(MHC)限制等優點，相對其它用于免疫治療的細胞受到了更廣泛的關注和臨床應用。但是NK細胞在外周血中僅占淋巴細胞的10%-15%，在臍帶血中的含量更低，隻有5%左右，其數量和純度尚不能滿足臨床治療的需要。

經過反複實驗，公司研發團隊通過對傳統方法的改進和優化，發明了一種操作步驟相對簡便，安全高效的可用于同種異體回輸的高純度NK體外擴增方法，該方法的優勢主要體現在：

圖1不同分離方法分離純化NK細胞的效果

A分離純化前NK細胞所占淋巴細胞的比率，B用Ficoll淋巴細胞分離液分離方法分離純化後NK細胞所占淋巴細胞的比率，C本發明專利方法分離純化後NK細胞所占淋巴細胞的比率

1、純度高。

本發明專利方法與傳統的Ficoll淋巴細胞分離液分離方法相比，分離獲得的NK細胞純度可達98%以上，操作步驟簡單，減少了中間環節污染的可能性，分離純化的操作時間也由4小時降低至1小時左右（見圖1）；培養14天後，本發明專利方法本發明專利方法培養的NK細胞陽性率高達99.8%，顯著高于傳統方法的55.4%（見圖2）。

本發明專利方法所制備的NK細胞，排除了T細胞，Treg細胞，B細胞的污染，對腫瘤細胞的殺傷活性高，可滿足美國NHLBI（National heart, lung and blood Insititute）用于同種異體回輸的标準（CD3-CD56 NK細胞達到90%以上，CD19 B細胞和CD3 T細胞低于5%），不但可用于自體NK回輸，也可以用于同種異體NK的回輸。

圖2 培養14天CD3-CD56 NK細胞的陽性率，A傳統方法、B本發明專利方法

2、安全可靠。

本發明專利方法創造性的使用Herceptin（赫塞汀）作為包被物來激活NK細胞，因此在培養過程中不再依賴于傳統方法所必需的飼養細胞,杜絕了異源生物污染，提高了使用安全性，同時避免了回輸後由于體内和體外環境的差異對NK細胞在體内的擴增和殺傷活性的影響。同時，其分離純化及體外擴增時間短；而且操作簡單，減少了中間環節污染的可能性。

3、擴增倍數高。

本發明專利方法可以從外周血或臍帶血中高效擴增NK細胞，可使其擴增200-1000倍，獲得滿足臨床使用的NK細胞（見圖3）。

圖3 擴增培養14天NK細胞的擴增倍數

圖4 擴增培養14天NK細胞對惡性腫瘤細胞K562的殺傷活性

A、B傳統方法，C、D本發明專利方法

4.殺傷活性強。

本發明專利方法所制備的NK細胞在靶效比1:1、1:2時，對惡性腫瘤細胞K562的殺傷效率均顯著優于傳統方法制備的NK細胞（1:1時，C本發明專利方法66.4%>A傳統方法19.3%；1:2時，D 本發明專利方法84.6%>B傳統方法25.8%）。

綜上所述，本發明專利方法提供的NK細胞分離培養方法，可以從外周血或臍帶血中高效獲得滿足臨床使用的NK細胞，細胞數量多、純度高、殺傷活性好，在同種異體NK回輸方面具有突出優勢，而且本發明專利方法操作簡單、分離培養時間短，具有良好的應用前景。

文 | 新生命幹細胞 圖 | 網絡

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