高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，将具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱内各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用【1】。

HPLC工作原理：

混合物各組分别通過與固定相、流動相之間的相互作用，在色譜柱中進行分離純化，固定相是存在于色譜柱中一種非常小的多孔顆粒材料，流動相是在高壓迫使下通過色譜柱的一種溶劑或混合溶劑。用注射器注入樣品，通過一個連接樣品回路的閥門，使樣品與流動相混合，随後樣品中各組分以不同的速率通過色譜柱，由于各組分與固定相之間的吸附能力不同，各組分依次流出色譜柱，通過合适的檢測器将組分濃度轉換成電信号傳遞到計算機的HPLC軟件上。運行結束後，在HPLC軟件中就可以得到色譜圖

HPLC工作原理圖及儀器組成【2】：

HPLC技術優勢：

具有高壓、高效、高速、高靈敏度、高選擇性等特點。

HPLC實驗用水建議：

高效液相色譜HPLC流動相的水應該是電導率為18.2 M/cm（25℃）的超純水，并通過0.22um終端過濾器，除去顆粒物、有機物、無機離子及 CO2等氣體的超純水

液相色譜實驗建議用低TOC含量的一級水

因為水中的雜質可能：

1、在梯度運行中污染物會産生峰，這将加劇峰的鑒定和量化的困難程度；

2、标準液用含有雜質的超純水配置時，樣品的鑒定和量化時就不會太精确；

3、可能會損壞高效液相色譜HPLC的柱子

液相色譜實驗用超純水機推薦：

Smart Mini超純水機采用全塑模具生産，外觀漂亮，體積小，不占實驗室空間，為減少産生TOC的來源可能，整機采用簡潔化設計，減少主機内純水管路，采用内置6.5L Mini純水水箱盡量減少微生物滋生可能性，配備降解TOC含量的UV紫外燈，做到自來水進出純水和超純水的一機兩用，性價比較高。

HPLC日常操作注意事項【3】【4】

選擇流動相時應注意的幾個問題：

1、使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。

2、避免流動相與固定相發生作用而使柱效下降或損壞柱子。

3、試樣在流動相中應有适宜的溶解度，防止産生沉澱并在柱中沉積。

4、流動相同時還應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有較強的紫外吸收，一般檢測波長應大于流動相的截止波長。

泵的維護保養：

1、防止任何固體微粒進入泵體，否則會磨損柱塞、密封環缸體和單向閥，因此應預先對流動相進行過濾，可采用Millipore濾膜(0．22μm或 0．45μm )等過濾。泵的入口都應該連接砂濾棒(或片)， 輸液泵的濾器應經常更換。

2、流動相不應含有任何腐蝕性物質， 含有緩沖液的流動相不應保留在泵内， 尤其是停泵過夜或更長時間。分析工作結束後必須用純水充分清洗後，再換成适合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合固定相，可以是甲醇或甲醇和水)

3、泵工作時要留心防止溶劑瓶内的流動相用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、密封環或缸體，最終産生漏液。

4、輸液泵的工作壓力不要超過規定的最高壓力，否則會使高壓密封環變形，産生漏液。

紫外檢測器維護保養：

1、流通池進入氣泡會幹擾基線，并極難排出，應使用充分脫氣的流動相，以減少氣泡的産生。

2、應定期沖洗系統，避免流通池幹涸。

3、檢測器中氘燈( 光源) 随着使用時間的增加，氘燈強度降低，噪音會不斷增大，故分析前柱平衡得差不多時，再打開檢測器，分析工作結束及時關閉檢測器（頻繁開關檢測器也會縮短檢測器壽命，一般開啟間隔少于4小時，不建議關閉檢測器）。

4、塵埃在靜電的作用下容易覆蓋在光學元件上， 使光傳播效率降低，增加了光散射， 影響分析效果， 因此檢測器周圍的環境應保持清潔。

内容引用：

【1】高效液相色譜在中草藥質量控制中的應用?．中國知網

【2】圖片來源：迪信泰檢測平台

【3】趙貝貝，張豔，唐濤，等．高效液相色譜的使用與維護．實驗室科學，Jun. 2011，Vol. 14 No. 3

【4】王淑靜，畢建傑，柳洪潔，郝建民，等．高校液相色譜使用中常見問題及對策．實驗室研究與探索， 11. 2010 ，Vol. 29 No. 11

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