中華大蟾蜍幼蟾的攝食節律研究

基金項目： 上海市（2017）蟾酥藥材産業鍊标準體系的建立及關鍵技術研究（17DZ2201300）。

_高子陽等

中華大蟾蜍（Bufo gargarizans gargarizans）俗稱癞蛤蟆，隸屬于兩栖綱（Amphibia）無尾目（Anura）蟾蜍科（Bufonidae）蟾蜍屬（Bufo）。在我國東北、華北、華東、華中、西北、西南等省區均有分布，國外分布在俄羅斯、朝鮮 。蟾蜍不但是農作物、牧草和森林害蟲的天敵，而且是動物藥蟾酥的藥源。蟾酥是我國傳統名貴中藥材，是中華大蟾蜍耳後腺分泌漿液經幹燥加工後制成。蟾酥所含成分複雜，通過對蟾酥的分離鑒定，已确定的化學成分主要包含蟾蜍毒素類、甾醇類、蟾毒色胺類、氨基酸、有機酸等 。現代藥理學研究表明，蟾酥具有抑制腫瘤細胞、強心、抗心肌缺血、升壓、局部麻醉、鎮痛、抗炎等作用，且在臨床上應用廣泛。由于環境破壞和不合理利用，中華大蟾蜍的野生資源日益枯竭，開展規範化人工養殖才能滿足日益增長的市場需求。

當前，蟾酥市場缺口大，經濟價值高，而中華大蟾蜍的人工養殖技術仍未成熟，現有的蟾蜍養殖戶多以探索性為主，養殖效益較低、規模小。研究學者已經對中華大蟾蜍及其蝌蚪的食性 、變态與發育 、養殖密度 、蟾蜍耳後腺分子生物學、組織學和超微結構及蟾蜍适宜的生态環境等方面進行了大量的基礎性研究。而對中華大蟾蜍養殖模式、養殖病害防治、人工育種、人工配合飼料和投喂模式等研究較少。

攝食節律是動物不同時間内攝食強度變化的規律，是動物在長期進化過程中對光周期、溫度、餌料豐度等周期性變化主動适應的結果。科學投喂模式的建立要以養殖動物自身的攝食節律為基礎。中華大蟾蜍的攝食節律研究有利于調整養殖蟾蜍投喂時間和投喂量，減少飼料浪費，提高餌料利用率。龔雙姣等研究了中華大蟾蜍蝌蚪階段（孵出後 54 日齡）的攝食節律，而中華大蟾蜍幼蟾階段攝食節律的研究尚未見報道。本研究觀察中華大蟾蜍幼蟾在不同投喂頻率下的攝食情況，總結其攝食節律，為中華大蟾蜍幼蟾養殖最佳投喂模式的确定提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗條件

試驗在塑料養殖盒中進行，塑料養殖箱規格為長、寬、高 70 cm×40 cm×20 cm，将養殖箱傾斜放于地面，箱底與地面呈 15°夾角，養殖箱内注入曝氣自來水，水面占箱底面積的 1/3，水深5 cm。在水中鋪設空心蓮子草和瓦片，便于幼蟾栖息隐蔽。試驗期間，每天更換一次水體，每次更換水體的 1/2 左右。水溫維持在 23.2～24.1℃，環境濕度 保 持 在 60%～80%， 氨 氮 濃度 低 于0.1 mg/L，pH 7.0～7.6。試驗在 12 h 白天、12 h夜晚的自然光周期下進行。塑料養殖箱放置于光照良好、通風和安靜的室内實驗室中。

1.2 蟾蜍

所用幼蟾為山東中華大蟾蜍蝌蚪經人工飼養變态得到的個體。試驗前 7 d 選取規格基本一緻，體重為 0.6～1.0 g 的健康幼蟾，每個養殖箱随機放 10 隻幼蟾，在相同環境下飼養馴化 7 d 後，開始試驗。

1.3 試驗設計

試驗設計了每日不同時間點 8 次投喂（組 1）和每日不同時間點 1 次投喂（組 2）2 個組别，組 1是 每 天 在 05:00、08:00、11:00、14:00、17:00、20:00、23:00、02:00 8 個時間點對幼蟾定量投喂适口的黃粉蟲，2.5 h 後收集殘餌稱重，每個養殖箱每天投喂 8 次，設 3 個重複組，共 3 個養殖箱；組 2 是在與組 1 相同的 8 個時間點對幼蟾投喂适口的黃粉蟲，2.5 h 後收集殘餌稱重，每個養殖箱每天投喂 1 次，設 3 個重複組，每個重複組 8 個養殖箱，共 24 個養殖箱。試驗開始前停食 1 d 并稱量每個重複組幼蟾的初始總體重，每次投喂各重複組幼蟾總體重 10% 的黃粉蟲。試驗連續進行 7 d，試驗結束後停食 1 d 并稱取每個重複組幼蟾終末總體重。取後 5 d 數據統計分析。

1.4 數據處理與統計分析

使用攝食率作為評估攝食節律的指标，其計算公式按照楊瑞斌等所提供的方法進行處理。運用Excel 2019進行數據處理，利用SPSS 22軟件進行統計分析。不同時間點的攝食率經單因素方差分析（ANOVA），進行多重比較，評估各時間點攝食率的差異顯著性情況。使用 t 檢驗比較分析 2 種投喂處理下相同時段攝食率的差異性。

2 結果與分析

2.1 日投喂 8 次條件下的攝食節律

攝食率是指攝食的餌料占動物體重的百分比，在生産中，通常使用攝食率來衡量動物的攝食情況。試驗過程中，幼蟾的活動正常，沒有死亡發生。如圖 1 所示，一日 8 次組幼蟾全天在不同時段均有攝食，并且在一天的攝食中呈現出明顯的節律性。日投喂 8 次條件下的試驗結果表明，08:00 幼蟾攝食率比其他各時段攝食率高，與除17:00、20:00 時段外的其他時段存在顯著差異性（P ＜ 0.05），17:00 時段幼蟾攝食率比除 08:00 時段以外的其他組高，且與各時段差異均不顯著（P ＞ 0.05），幼蟾在 08:00 和 17:00 出現攝食高峰，其餘時間點攝食量較少；經多重比較發現，幼蟾在夜晚投喂時段攝食率之和與白天投喂時段攝食率之和相比明顯較高。日投喂 8 次條件下，中華大蟾蜍幼蟾的單次攝食率為 0.65%～5.75%，日平均攝食率為（15.22±0.56）%。本研究結果表明，在餌料豐盈時中華大蟾蜍幼蟾的攝食強度高，在餌料豐盈的條件下更趨向于早晨和傍晚攝食，這與其自然狀況下的生活習性是密不可分的，屬于比較典型的晨昏攝食型。

2.2 日投喂 1 次條件下的攝食節律

圖 1 所示一日 1 次組，中華大蟾蜍幼蟾在一天中的不同時間點均有攝食活動，02:00 和 23:00投喂時段幼蟾攝食率比其他時段組攝食率低，與 05:00、08:00、11:00、17:00 時間段存在顯著差異（P ＜ 0.05），08:00 時段幼蟾攝食率比 20:00攝食率高，但差異不顯著（P ＞ 0.05），幼蟾在05:00、08:00、17:00 出現攝食高峰，其他時間點攝食率較低，但在 02：00 攝食率最低。日（次）攝食率為 3.24%～8.83%，日平均攝食率為（6.09±0.26）%，與一日 8次投喂頻率時的日平均攝食率相比較低。本試驗結果說明，餌料豐富程度對中華大蟾蜍幼蟾的攝食節律産生了影響，同時腸胃容量、腸胃排空時間、腸胃消化率等因素會對幼蟾攝食量産生影響。

圖 1 不同投喂條件下中華大蟾蜍幼蟾的攝食節律

2.3 2 種投喂處理下同一時段的攝食率比較

如圖 1 所示，一日 1 次投喂頻率時，幼蟾每一時段的攝食率與一日 8 次投喂頻率條件下，同一時段的攝食率相比，日投喂 1 次幼蟾攝食率明顯較高，經過 t 檢驗後，結果表明，2 種不同投喂處理下相同時段的攝食率差異顯著（P ＜ 0.05），攝食率能夠反映幼蟾的攝食情況，說明中華大蟾蜍幼蟾的攝食是受餌料豐度和腸胃容量雙重因素的影響。

3 結論與讨論

3.1 中華大蟾蜍幼蟾的攝食節律分析

本研究采用日攝食率法，探讨了中華大蟾蜍幼蟾在一日 1 次投喂頻率和一日 8 次投喂頻率下的攝食節律。結果表明，幼蟾全天不同時段都有攝食，并且表現出明顯的節律性。攝食主 要 集 中 在 05:00～08:00 以 及 17:00 左 右， 而在 11:00～14:00 和 23:00～02:00，攝食處于低迷狀态，這與中華大蟾蜍蝌蚪攝食節律有相似趨勢 。在泰國虎紋蛙的規模化養殖中，飼料的投喂主要在 06:00～07:00 時和 17:00～18:00 。在自然界内，野生蟾蜍的攝食活動主要集中在傍晚和清晨 ，與本試驗結論相似。多數動物的攝食活動都有明顯的日周期變化規律，根據動物的攝食規律，可以将動物攝食節律分為白天攝食、晚上攝食、晨昏攝食和無明顯節律型。本試驗結果表明，中華大蟾蜍幼蟾的攝食節律屬于晨昏攝食型。

結果表明，中華大蟾蜍幼蟾的攝食受餌料豐度和胃充塞度的影響，在相同的攝食時間，一日 1 次組的單次攝食率都顯著高于一日 8 次組的單次攝食率，而一日 8 次組的日攝食率顯著高于一日 1 次組的日攝食率。動物的攝食節律是長期進化而來的内源性節律，受光照、溫度、餌料豐度及不同發育時期等因素的影響。李鹄鳴等報道了水溫升高時棘胸蛙蝌蚪和牛蛙蝌蚪食量增加。蟾蜍在秋季時攝食量增大，為冬眠補足營養 。本試驗 2 種投喂模式下，相同時間段幼蟾的攝食率差異顯著，但是總體仍然呈現出晨昏攝食的規律。

3.2 中華大蟾蜍幼蟾投喂模式分析

投喂模式是由投飼量、投飼時間、投飼頻率、投飼模型等環節相互關聯組成的有機整體，是集約化養殖管理的核心之一，以獲得最優生長速率、最小飼料浪費和最低水質污染為目标 。以養殖動物内源性攝食節律為生物學基礎，确定最佳投喂時間、最适投喂量，有利于提高動物的飼料利用率，适宜的投喂時間應該避免攝食低谷，選擇在動物攝食高峰階段。根據本研究結果，幼蟾在早晨和黃昏時段攝食率要顯著高于其他時段，因此每天可以分别在早晨和傍晚對幼蟾進行投喂，投喂頻率 2 次/d。根據本試驗結果，幼蟾的日平均攝食率約為 15％，根據之前的養殖經驗來看，每天對幼蟾投喂幼蟾體重 10％的黃粉蟲即可獲得較好的養殖效果，幼蟾對黃粉蟲的消化較好，而按 15% 投喂時，糞便中存在較多未完全消化的黃粉蟲，因此每天早晚各投喂 1 次，每次的投喂量應在 5％左右。蟾蜍的攝食受溫度、季節、生長階段的影響。投喂量能顯著影響養殖動物的生長，需要根據蟾蜍的最高生長率和最低飼料系數來綜合評定最适投喂量，因此，養殖蟾蜍各階段的最适投喂量需要進一步的研究探讨。

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