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以下所有試劑如無特别說明，均為分析純。所用水為去離子水或蒸餾水。

（1） 甲苯

（2） 0.5% 磷酸苯二鈉

（3）硼酸鹽緩沖液（PH9.6與PH10.0）：稱取12.404g硼酸（H3BO3）溶于700ml去離子水，用稀NaOH溶液調節至PH10.0，用去離子水稀釋至1000ml

（4）氯代二溴對苯醌亞胺試劑：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亞胺，用10ml 96%的乙醇溶解，貯于棕色瓶中，存放在冰箱裡。保存的黃色溶液未變褐色之前均可使用。

（5）标準溶液：

母液：1g酚溶于蒸餾水中，并稀釋至1000ml，溶液保存在暗色瓶中

工作液：10ml溶液（a）稀釋至1000ml（1ml含10ug酚）

（6）0.3%硫酸鋁溶液

标準曲線繪制：取0，1，3，5，7，9，11和13ml酚工作液（b），置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml緩沖液和4滴氯代二溴對苯醌亞胺試劑，顯色後稀釋至刻度，30min後比色測定。以光密度為縱坐标，濃度為橫坐标繪成标準曲線。

容量瓶（1000ml、200ml、50ml各若幹）、燒杯、分析天平（0.0001g）、20ml量筒 、分光光度計（UV-1800PC）、膠頭滴管、移液槍、恒溫箱、小漏鬥等

（1）取适量風幹土置于200ml三角瓶中，用5滴甲苯處理15min後，加入20ml 0.5%磷酸苯二鈉；

（2）将反應混合物置于37℃恒溫箱中，培養24h後，在培養液中加100ml 0.3%硫酸鋁溶液用緻密濾紙過濾。

（3）無土對照：不加土樣，其他操作與樣品實驗相同。以檢驗試劑純度，整個實驗設置一個對照

（4）無基質對照：對每個土樣，設置以等體積的水代替基質，其他操作與樣品實驗相同。

（5）比色程序：取濾液3ml置于50ml容量瓶中，然後按繪制标準曲線所述方法顯色。用硼酸緩沖液時，呈現藍色，在分光光度計上于510nm處比色。

磷酸酶活性，以24h後1g土壤中釋出的酚的毫克數表示：

酚（mg）=a ×8..............................(1)

(1)式中:

a——從标準曲線上查得的酚毫克數

8——換算成1g土的系數

以24h後1g土壤中釋放出的酚的質量（mg）表示磷酸酶活性。

(2)式中：

a樣品為樣品吸光值由标準曲線求得的酚毫克數；

a無土為無土對照吸光值由标準曲線求得的酚毫克數；

a無基質為無基質對照吸光值由标準曲線求得的酚毫克數；

V為顯色液體積；

n為分取倍數，浸出液體積／吸取濾液體積；

m表示烘幹土重

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