總抗氧化能力簡介

氧化應激是體内産生的自由基超出了機體抗氧化清除的能力，引起細胞和組織氧化損傷的一種狀态。防禦氧化應激，主要依靠機體内的抗氧化體系。

根據清除機制的不同，抗氧化體系大緻可分為兩個系統：酶抗氧化系統和非酶抗氧化系統。每一個系統都存在多種物質。

氧化應激的産生與檢測

體系内各種抗氧化大分子、小分子和酶的總水平，反映了該體系内的總抗氧化能力（T-AOC）。T-AOC能更全面地評價體液、細胞和組織勻漿、食品和飲料的抗氧化劑含量，廣泛應用于醫學、食品科學等相關研究。

02 總抗氧化能力的檢測方法

a 鐵離子還原抗氧化能力測定法（FRAP法）

FRAP法（ferric reducing antioxidant power），即在酸性條件下，Fe3 -TPTZ被樣本中的抗氧化物質還原為藍色的Fe2 -TPTZ，并在593nm波長處産生特征吸收峰。以Fe2 為标準，通過吸光度的大小，可以計算樣本的抗氧化能力。

FRAP法測定步驟簡單，速度快，但其本質是以Fe2 進行等量替代的計算方法，反應本身并不具備抗氧化能力的生物學相關性。

b 菲啉法

樣本中的抗氧化物質能将Fe3 還原成Fe2 ，後者與菲啉類物質形成穩定的橙紅色絡合物，在520nm波長處産生特征吸收峰。通過測定吸光度的變化量，可以計算出抗氧化物質的還原能力。

該方法測定的最終結果以活性單位方式表達，便于與其他生理指标進行對比。但其特征吸收波長與部分樣本及抗氧化劑的吸收波段有重疊，需要進行對照試驗。

c ABTS法（TEAC法）

ABTS[2,2’-聯氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)]法，又稱TEAC（trolox equivalent antioxidant capacity）法。ABTS與适當氧化劑作用後，會生成藍綠色的ABTS陽離子自由基（ABTS• ），在734nm波長處産生特征吸收峰，當抗氧化物質存在時，ABTS• 的生成會受到抑制，使吸光度降低。與Trolox标準對照體系相比較，就能計算出樣本的總抗氧化能力（TEAC值）。

ABTS法操作簡單，結果重複性較好，非常适合實驗室的分析檢測，對水溶性和脂溶性抗氧化劑都适用，适用于大批量生物樣品（包括血清在内）、果蔬類、部分純物質等樣本的體外抗氧化能力測定。

d 二苯基苦基苯肼（DPPH）法

DPPH•是一種穩定的氮中心顯色自由基，在517nm波長處産生特征吸收峰。樣本中的抗氧化物質會使DPPH•的吸光度減小直至消失，其吸光度的變化量在一定區間内與抗氧化物質含量呈線性關系。

DPPH法快速、簡單，但其檢測波長與部分抗氧化物質本身的吸收波段重疊（如類胡蘿蔔素）。因此，在檢測該類物質時，結果會有一定偏差。

e 氧化自由基吸收能力測定（ORAC）法

ORAC（oxygen radical absorbance capacity）法測定氧化自由基的吸收能力，以AAPH為自由基來源，熒光素（SF）為指示劑，Trolox為定量标準。

熒光素受到自由基攻擊後，熒光強度會持續衰減；抗氧化物質對自由基的吸收作用，能延緩熒光素的衰減速率。通過熒光分析儀，對熒光衰減曲線下面積（AUG）進行定量分析，可以計算樣本的自由基清除能力。

ORAC提供的自由基與生理過程中的自由基具有高度一緻性，具有較高的特異性。但其所需實驗儀器較為昂貴，且對溫度和熒光标記物要求較高，操作難度較大。

03 總結

總抗氧化能力的評價方法，因檢測原理、反應條件等的不同而多種多樣，每一種方法都有其适用範圍和特點。

目前，還沒有哪一種方法能夠全面地評價出樣本的總抗氧化能力。實驗中，往往需要至少兩種方法同時測定。對于具體樣本，應根據分析條件和作用底物等因素，綜合選擇相應的檢測方法。

以上五種方法中，DPPH法、FRAP法和 ABTS法較為簡便易行，但DPPH、ABTS的化學性質使其偏離生物環境較遠；FRAP法和 ABTS法在結果上具有很好的相關性與一緻性，尤其是在成本和操作上，具有明顯的比較優勢。

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