DCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) 中文名稱是“抗體依賴的細胞介導的細胞毒性作用”。NK細胞是介導ADCC的主要細胞，今天咱們就聊聊基于NK細胞的ADCC療法。

ADCC效應機制

當IgG抗體通過Fab段與靶細胞（病毒感染的細胞或腫瘤細胞）表面抗原決定簇特異性結合後，其Fc段可與有FcγR受體的效應細胞（NK細胞、單核-巨噬細胞、中性粒細胞等）結合，觸發效應細胞的殺傷活性，直接殺傷靶細胞。

NK細胞有慧眼

NK細胞表面有衆多受體，分為激活性受體Activating receptors和抑制性受體Inhibitory receptors兩類。

健康細胞通過MHC I類分子，與NK細胞表面的抑制性受體結合，使NK細胞處于靜息狀态，避免誤傷。

圖1 NK細胞識别健康細胞MHC I

腫瘤細胞激活NK 細胞的機制可以分為兩種：一種是丢失MHC I的腫瘤細胞，因丢失了抑制信号而成為了NK細胞的目标。另一種是過表達激活性配體的腫瘤細胞，會結合更多激活性受體而使激活信号增強，克服抑制信号，從而被NK細胞殺傷。

圖3. 基于NK細胞的ADCC療法

上述兩種ADCC療法中的抗體起到了調控NK細胞活性的作用，是抗腫瘤抗體藥物研發的重點。在這類抗體的研發過程中，NK細胞是常用來檢測抗體ADCC效應的細胞。

NK細胞檢測抗體ADCC效應

使用NK細胞能真實反映抗體對靶細胞的ADCC效應，但是NK細胞通常需要從全血或者PBMC中進行分離，需要較高的實驗技巧，實驗周期長且實驗結果不易重複。傳統的檢測ADCC效應的方法有以下三種：

ADCC效應檢測的最經典的方法是鉻51(51Cr) 标記/釋放法。将具有放射性的鉻51與靶細胞孵育，鉻51會進入靶細胞；洗去多于未進入細胞的鉻51，再将靶細胞和效應細胞以及抗體共同孵育。如果靶細胞被殺傷，鉻51就會被釋放出來，檢測溶液中的放射性同位素含量即可确認靶細胞被殺傷的情況。該方法是ADCC檢測靶細胞被殺傷的金标準，然而因為帶有放射性元素、費時費力且實驗變化性大而較少使用。

細胞毒性測試 (Cytotoxicity assay) 利用類似鉻51的原理但使用熒光的方法來檢測靶細胞的死亡，如calcein-AM本身沒有熒光且很容易地進入活細胞，進入活細胞後就變身成強熒光的calcein，若細胞被殺傷，熒光信号就可以在胞外被檢測到。此方法可用于高通量快速篩選并獲得實驗同質性高的結果，然而效應細胞自身也會裂解導緻高背景值的訊号産出。

CFSE(carboxy fluorescein succinimidyl ester)，利用雙重染料：CFSE标記靶細胞，FVD标記死細胞，以流式細胞術來定量ADCC殺傷靶細胞的方法。此方法以多參數方法進行檢測，操作簡單并可獲得可信的實驗結果。

ADCC效應檢測新方法

InvivoGen開發檢測ADCC效應的報告基因細胞，可替代傳統的依賴于NK細胞毒性活性的檢測方法，用于抗體藥物的初期篩選，大大提高篩選效率。在生物實驗中，使用基因工程改造的人源T細胞系來檢測NFAT（活化T細胞核因子）激活，這是ADCC誘導的早期信号。通過測量NFAT依賴的熒光素酶報告蛋白産生的生物發光信号，可以顯示ADCC的誘導水平。

ADCC效應報告基因細胞系

Jurkat-LuciaTM NFAT-CD16細胞

由人源T淋巴細胞Jurkat細胞系進行基因工程改造而得。細胞系在最小啟動子和6個NFAT反應原件的控制下穩定表達Lucia熒光素酶報告基因，以及細胞表面Fc受體CD16a（FcγRIIIA; V158高親和力同種異體）。Jurkat細胞天然表達NFAT功能性信号通路。

Jurkat-LuciaTM NFAT-CD16細胞已經用不同的靶細胞和特定的單克隆抗體同種型組合進行功能測試。

産品特點：

穩健可靠：結果重複性高

快速：在一天内完成生物測定（總培養時間7小時）

方便：優化效應與靶細胞的比例、熒光讀數儀即可進行檢測

高性價比：20代内均可保持基因穩定。

圖4. ADCC報告細胞基礎檢測法

1-ADCC 誘導：将表達表面抗原的靶細胞與特異性單克隆抗體一起培養1小時，之後以适當的靶效比添加Jurkat-LuciaTM NFAT-CD16效應細胞并培養6小時。

2-添加熒光素酶檢測試劑Quanti LucTM : 将檢測試劑添加到上清液樣品中。3-ADCC測量：使用熒光讀數儀檢測生物發光信号。

免疫檢查點抑制劑靶細胞

Raji-hCTLA4細胞

Raji-hPD-1細胞

Raji-hPD-L1細胞

Raji-hTIGIT 細胞

這四個細胞系屬于Raji（人B淋巴細胞）衍生靶細胞系列，這些靶細胞不僅穩定表達免疫檢查點如人CTLA-4、人PD-1、PD-L1、TIGIT，而且表達腫瘤抗原如HER2、EGFR和CD20（Raji 細胞天然表達的抗原）。

實驗數據：

圖5. 使用Raji-hCTLA4靶細胞比較抗人CTLA4天然和工程化同種型的ADCC效應

将Raji-hCTLA4細胞與梯度稀釋的抗-hCTLA4或抗β-半乳糖苷酶單克隆抗體培養1小時。然後把Jurkat LuciaTM NFAT-CD16效應細胞與靶細胞共培養6小時。通過使用Quanti-LucTM 測定上清液中熒光素酶活性來評估。

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