細胞工程作業答案?試卷一一、名詞解釋：（本題共10小題，每小題4分，共40分），今天小編就來聊一聊關于細胞工程作業答案?接下來我們就一起去研究一下吧!

細胞工程作業答案

試卷一

一、名詞解釋：（本題共10小題，每小題4分，共40分）

1、動物乳腺生物反應器：利用哺乳動物乳腺特異性表達的啟動子元件構建轉基因動物,指導外源基因在乳腺中表達,并從轉基因動物的乳液中獲取重組蛋白。

2、細胞融合：又稱體細胞雜交，是指兩個或更多個相同或不同細胞在離體的條件下以無性方式通過膜融合形成單個雜合細胞的過程。細胞融合技術的出現标志着細胞工程的誕生。細胞融合使人們可以按照預先設計使不同的細胞融合，創造新的雜合細胞。

3、胚胎移植：也稱受精卵移植，是指将良種母畜配種後，從其生殖道（輸卵管或子宮角）取出受精卵或早期胚胎，移植到同種生理狀态相同的母畜體内，使之繼續發育成為新個體的技術。

4、胚胎幹細胞：是從早期胚胎内細胞團（ICM）分離出來的，能在體外培養的一種高度未分化的多能幹細胞。

5、核移植技術：是利用顯微操作技術将一個細胞的細胞核移植到另一個細胞中，或者将兩個細胞的細胞核（或細胞質）進行交換，從而可能創造無性雜交生物新品種的一項技術。核移植技術是目前最常用的動物克隆技術，也是哺乳動物體細胞克隆的核心技術，成為生命科學研究的熱點。

轉基因動物：指借助基因工程技術将外源基因導入受體動物染色體内，外源基因與受體動物基因發生整合後随細胞的分裂而擴增，在體内表達并能穩定地遺傳給後代的動物。

7、染色體工程是人們按照一定的設計，有計劃地消減、添加或代換同種或異種染色體，從而達到定向改變遺傳特性和選育新品種的一種技術。

8、花藥培養：是指将成熟或未成熟的花藥從母體植株上取下，在無菌條件下，生長發育的技術。

9、愈傷組織：指在人工誘導或自然條件下，植物細胞脫分化，不斷增殖産生的主要有薄壁細胞構成的不定形的組織。它通常從在傷口部位産生。

10、懸浮培養：指的是一種在受到不斷攪動或搖動的液體培養基裡，培養單細胞及小細胞團的組織培養系統。小規模的懸浮培養可在培養瓶中進行；大規模的需要利用生物反應器生産懸浮培養分為兩種類型：分批培養和連續培養。

二、簡答題（本題共5個小題，每小題6分，共30分）

1、簡述獲得轉基因動物的一般步驟有哪些？

（1）外源目的基因的制備

（2）外源目的基因有效導入生殖細胞或胚胎幹細胞

（3）選擇并獲得攜有目的基因的細胞

（4）選擇合适的體外培養系統和宿主動物

（5）轉基因細胞胚胎發育及鑒定

（6）篩選所得的轉基因動物品系

2、什麼是原代培養，其生物學意義是什麼？

原代培養就是初次培養，是從供體獲取組織後的首次培養。其最大優點是組織和細胞剛剛離體，生物學特性未發生很大變化，仍具有二倍體遺傳特性，最接近和反映體内生長特性，很适合作藥物測試、細胞分化等實驗研究

原代培養所有機能上的改變主要是表型上的改變，不一定為體細胞突變。因此，原代培養細胞也是研究基因表達的理想系統。原代培養是建立各種細胞系的第一步，是從事組織培養工作人員熟悉和掌握的最基本的技術。

3、何謂組織工程，組織工程的主要研究内容是什麼？

組織工程是指應用工程學和生命科學的原理和方法來研究正常或病理狀況下哺乳動物組織的結構、功能和生長的機制，研究開發能夠修複、維持或改善損傷組織的人工生物替代物的一門學科。

組織工程的主要研究内容包括組織工程化皮膚、組織工程化骨骼、組織工程化血管、組織工程化管狀器官、組織工程化腺體器官等。

4、單細胞培養的技術方法有哪些？

（1）平闆培養：将細胞分散成單細胞，然後和含有瓊脂的培養基混合，然後鋪成平闆。

（2）看護培養：在愈傷組織上放一張無菌濾紙，然後将單細胞置于濾紙上，單細胞在看護組織的看護下能分裂生長。

（3）微滴培養：在無菌條件下，在載玻片上用石蠟油和蓋玻片等制成一微室，含培

養液的細胞培養在這一微室中，在顯微鏡下可進行細胞的生長、分裂和小細胞團形成的全過程觀察。

（4）條件培養：加入條件培養液（經一定時間細胞懸浮培養的培養液）。适于單細胞或低密度的細胞的培養。

（5）飼養層技術：某種植物核失活的活細胞制成一薄層，把要培養的單細胞以液體淺層或平闆培養在這一薄層上。适低密度的細胞。

5、簡述農杆菌介導轉化法的原理？

根瘤農杆菌的細胞中含有Ti質粒，其上有一段T-DNA，農杆菌通過侵染植物傷口進入細胞後，可将T-DNA插入到植物基因組中。人們将目的基因插入到經過改造的T-DNA區，借助農菌的感染實現外源基因向植物細胞的轉移與整合，然後通過細胞和組織培養技術，再生出轉基因植株。

三、論述題：（本題共2個小題，每小題15分，共30分）

1、詳述胚胎幹細胞法獲得轉基因動物操作過程及該方法的優缺點。

胚胎幹細胞是從早期胚胎内細胞團（ICM）分離出來的，能在體外培養的一種高度未分化的多能幹細胞。

（1）ES細胞的建立與維持：包括動物的準備、胚胎的分離和初培養、ICM的離散與ES的分離、ES細胞的擴增、ES細胞的常規培養。

（2）ES細胞的基因操作：

①與整合位點兩端區域同源的兩段DNA序列（HB1和HB2）

②轉入的目的基因（TG）

③編碼抗G418的新黴素磷酸轉移酶基因（neor）

④兩個不同的胸苷激酶基因（HSV-tk1和HSV-tk2）

（3）轉基因ES細胞的篩選：正選擇法篩選出轉基因整合型ES細胞：通過物理方法将重組DNA分子導入ES細胞，在含有抗菌素G418的培養基中，沒有整合外源基因的細胞将全部死亡，隻有整合了外源基因的細胞才可以存活下來。負選擇法篩選出特異整合型ES細胞：如果非特異性整合發生，則兩個tk基因或其中一個基因很大可能與TG和neor一起整合，這時用GCV篩選，tk基因表達的胸苷激酶能反GCV轉化成有毒的化合物，使細胞死亡。這是負選反擇。

（4）轉基因ES細胞的檢測：應用PCR法等

（5）轉基因小鼠的繁育正确整合的轉基因胚胎幹細胞經培養後就可以移入胚泡期的供體胚胎了。将這些胚胎移植到假孕的代孕母鼠子宮内，繁育轉基因小鼠。

（6）獲得純合的轉基因小鼠

2、外植體經哪些途徑可以再分化為完整植株？

（1）直接從外植體的細胞分化形成器官原基，然後由器官原基進一步發育給完整植株；或從培養中的器官、組織、細胞或原生質體直接分化成胚，中間不經過愈傷組織階段，如石龍芮的莖表面産生體細胞胚、槐樹子葉在切口愈傷化的同時于外植體内部分化産生體細胞胚。

（2)外植體先在合适的條件下脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再通過細胞分化、組織分化形成拟分生組織結節和微管組織結節，拟分生組織結節和微管組織結節發生聯系，可能導緻器官原基的形成，進一步可分化為器官，即由器官原基再逐漸形成芽和根。再進一步發育成完整植株。

（3)外植體先在合适的條件下脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再通過再分化形成胚性細胞團，胚性細胞團再在合适的條件下（去掉或降低生長素的濃度，增加氨根離子的含量）按照胚胎發育途徑發育成胚狀體，然後從其相反的兩極分别形成莖端和根端，然後發育成小植株。

試卷2

1、細胞工程：以細胞生物學和分子生物學為基礎理論，采用原生質體、細胞或組織培養等試驗方法或技術，在細胞水平上研究改造生物遺傳特性，以獲得具有新的性狀的細胞系或生物體以及生物的次生代謝産物，并發展有關理論和技術方法的學科。

2、單克隆抗體隻針對某一抗原決定簇的抗體分子稱為單克隆抗體。

3、胚胎冷凍保存就是将動物的早期胚胎，通過使用特殊的保護劑和降溫措施，使其長期何存在超低溫環境下。主要方法包括常規冷凍法、一步冷凍法和玻璃化法。

4、顯微注射：就是借助光學顯微鏡的放大作用，利用顯微操作儀，直接把DNA注射到動物早期胚胎、胚胎幹細胞、體細胞或卵母細胞中，然後生産動物個體的技術。

5、核移植技術：是利用顯微操作技術将一個細胞的細胞核移植到另一個細胞中，或者将兩個細胞的細胞核（或細胞質）進行交換，從而可能創造無性雜交生物新品種的一項技術。

6、動物生物反應器：一般把目的片段在器官或組織中表達的轉基因動物叫動物生物反應器，幾乎任何有生命的器官、組織或其中一部分都可經過人為馴化為生物反應器,從生産的角度考慮，生物反應器選擇的組織和器官要方便産物的獲得，例如，乳腺、膀胱、血液等，由此發展了動物乳腺生物反應器,動物血液生物反應器和動物膀胱生物反應器等。

7、染色體工程：是人們按照一定的設計，有計劃地消減、添加或代換同種或異種染色體，從而達到定向改變遺傳特性和選育新品種的一種技術。

8、懸浮培養：指的是一種在受到不斷攪動或搖動的液體培養基裡，培養單細胞及小細胞團的組織培養系統。小規模的懸浮培養可在培養瓶中進行；大規模的需要利用生物反應器生産懸浮培養分為兩種類型：分批培養和連續培養。

9、早熟萌發幼胚接種後，離體胚不繼續胚性生長，而是在培養基上迅速萌發成幼苗，通常稱之為早熟萌發。在大多數情況下，一個幼胚萌發成一個植株，但有時會由于細胞分裂産生大量的胚性細胞，以後形成許多胚狀體，從而可以形成許多植株，這種現象就是所謂的叢生胚現象。

10、人工種子：人工種子是将植物離體培養産生的體細胞胚包埋在含有營養成分和保護功能的物質中，在适宜條件下發芽出苗。人工種子包括體細胞胚、人工胚乳和人工種皮三部分。

二、簡答題（本題共5個小題，每小題6分，共30分）

1、細胞融合的方法有哪些？

（1）仙台病毒法仙台病毒法包括4個步驟：

1)兩種細胞在一起培養，加入病毒，在4°C條件下病毒附着在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚；2)37°C中，病毒與細胞膜發生反應，細胞膜受到破環，此時需要Ca2 和Mg2 ，最适PH為8.0一8.2；3)細胞膜連接部穿通，周邊連接部修複，此時需Ca2 和ATP；4)融合成巨大細胞，仍需ATP。

（2）聚乙二醇（PEG）法分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。由于PEG分子具有輕微的負極性，故可以與具有正極性基團的水、蛋白質和碳水化合物等形成H鍵，從而在在質膜之間形成分子橋，其結果是使細胞質膜發生粘連進而促使質膜的融合；另外，PEG能增加類脂膜的流動性，也使細胞的核、細胞器發生融合成為可能。

（3）電融合法電融合法是80年代出現的細胞融合技術，在直流電脈沖的誘導下，細胞膜表面的氧化還原電位發生改變，使異種細胞粘合并發生質膜瞬間破裂，進而質膜開始連接，直到閉和成完整的膜，形成融合體。

2、ES細胞的生物學特性有哪些？

（1）ES細胞形态結構及核型：各種動物的ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形态結構，胞體體積小，核大，呈克隆狀生長，ES細胞中多為常染色質，核型正常，保留了整倍體性質。

（2）ES細胞的高度分化潛能：ES細胞在體外需在飼養層細胞上培養才能維持其未分化狀态，一旦脫離飼養層就自發地進行分化。在單層培養時細胞自發分化成多種細胞，ES細胞還可進行誘導分化。

（3）堿性磷酸酶的表達：小鼠的EC細胞和ES細胞中均含有豐富的AKP。AKP常用來作為鑒定EC細胞或ES細胞分化與否的标志之一。

（4）胚胎階段特異性細胞表面抗原的表達：早期胚胎細胞表面均表達胚胎階段特異性表面抗原（SSEA－1）。SSEA也常作為ES細胞鑒定的一個标志。

3、簡述獲得轉基因動物的一般步驟有哪些？

（1）外源目的基因的制備

（2）外源目的基因有效導入生殖細胞或胚胎幹細胞

（3）選擇并獲得攜有目的基因的細胞

（4）選擇合适的體外培養系統和宿主動物

（5）轉基因細胞胚胎發育及鑒定

（6）篩選所得的轉基因動物品系

4、在組織培養中，如何區分早期芽和胚狀體？1971年，Haccius對胚狀體下了一個很好的定義，認為胚狀體在組織學上必需同時具備三個特征：（1）最基本的特征是具有雙極性，即在發育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端，而不定芽和不定根都為單向極性。

（2）胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無解剖結構的聯系，而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織相聯系。

（3）胚狀體的維管組織的分布是獨立的“Y”字形，而不定芽的維管組織無此現象。

5．簡述花藥培養和花粉培養的異同？

花粉培養和花藥培養異同點：花藥培養屬器官培養，花粉培養屬細胞培養，但二者培養的目的一樣，都是要誘導花粉細胞發育成單倍體細胞，最後發育成單倍體植株。培養特點及意義：花粉培養和花藥培養都指在合成培養基上，改變其發育機能，即不經過受精發生的細胞分裂，由單個花粉粒發育成完整植物。由于都能獲得同花粉染色體構成相同的單倍體植株，經染色體加倍而成為正常結實二倍體植株。所以後者屬于真正的純系。這和常規多代自交純化方法相比，可節省大量的時間和勞力。同時，花藥和花粉培養是研究減數分裂，花粉生長機制的生理、生化、遺傳等基礎理論的最好方法。

三、論述題：（本題共2個小題，每小題15分，共30分）

1、為何多莉羊的産生是生命科學領域的突破性工作？試分析克隆動物成敗的原因以及克隆技術存在的問題。

（1）多莉羊的産生是生命科學領域的突破性工作，

原因有二：

第一，解決了使供體細胞與核受體細胞（去核卵細胞）同步的方法問題。

第二，解決了用體細胞做核供體與轉基因的問題。（4分）

（2）克隆技術存在的問題：理論上存在的問題：

A）重構胚對遺傳物質重編程的機理還不清楚。

B）克隆動物是否會記住供體細胞的年齡。

C）克隆動物的連續後代是否會累積突變基因。

D）在克隆過程中胞質線粒體所起的遺傳作用等問題還沒有解決。（4分）

實踐中存在的問題：

1）克隆動物的成功率還很低；

2）生出的部分個體表現出生理或免疫缺限；

3）即使是正常發育的“多莉”，也被發現有早衰迹象（4分）除了以上的理論和技術障礙外，克隆技術（尤其是在人胚胎方面的應用）對倫理道德的沖擊和公衆對此的強烈反應也限制了克隆技術的應用。

2、外植體經哪些途徑可以再分化為完整植株？

（1）直接從外植體的細胞分化形成器官原基，然後由器官原基進一步發育給完整植株；或從培養中的器官、組織、細胞或原生質體直接分化成胚，中間不經過愈傷組織階段，如石龍芮的莖表面産生體細胞胚、槐樹子葉在切口愈傷化的同時于外植體内部分化産生體細胞胚。

（2)外植體先在合适的條件下脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再通過細胞分化、組織分化形成拟分生組織結節和微管組織結節，拟分生組織結節和微管組織結節發生聯系，可

能導緻器官原基的形成，進一步可分化為器官，即由器官原基再逐漸形成芽和根。再進一步發育成完整植株。

（3)外植體先在合适的條件下脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再通過再分化形成胚性細胞團，胚性細胞團再在合适的條件下（去掉或降低生長素的濃度，增加氨根離子的含量）按照胚胎發育途徑發育成胚狀體，然後從其相反的兩極分别形成莖端和根端，然後發育成小植株。

試卷三

一.名詞解釋（每題2分，共計10分）

生物技術：是以生物科學為基礎，利用生物體的特性和功能，設計構建具有預期性狀的新物種或新品系，以及與工程原理相結合進行加工生産，為社會提供商品和服務的一個綜合性技術體系。

胚性發育：植物幼胚接種到培養基上以後，仍然按照在活體内的發育方式發育，最後形成成熟胚(有時甚至可能類似種子)，然後再按種子萌發途徑出苗形成完整植株，這種途徑發育的幼胚一般一個幼胚将來就是一個植株。

亞原生質體：在原生質體分離過程中，有時會引起細胞内含物的斷裂而形成一些較小的原生質體，稱作亞原生質體。它可以具有細胞核或沒有細胞核。

體細胞胚：離體培養下沒有經過受精過程，但經過了胚胎發育過程所形成的胚的類似物。

TE細胞：植物在系統發育中，由根和芽的原形成層或次生形成層細胞分化形成的管狀細胞，它在維管系統的形成中具有中心作用。在離體培養條件下，TE細胞由愈傷組織薄壁細胞分化形成，這也是愈傷組織細胞分化器官的前提。

二.選擇題（下列各答案中出一正确答案，其代在答相從題備選選個并将号寫題紙應位置。每小處題1分，共10分。）

1.b是細胞全能性表達的最終體現。

a.脫分化；b.再分化；c.脫分化與再分化

2．愈傷組織的形成是脫分化的細胞重新進入活躍分裂的b。

a.過程；b.結果c.既不是過程也不是結果

3.植物組織培養常用的消毒劑中，下面哪種消毒劑的殘液最難去除？ca.次氯酸鈉；b.新潔爾滅；c.氯化汞

4.就一般規律而言，離體培養中光照的使用有b規律。

a.先強後弱；b.先弱後強；c.穩定光照

5.花粉培養屬于a範疇。

a.細胞培養；b.組織培養；c.器官培養

三.簡答題（每題4分，共計20分）

1.離體培養中器官發生的方式有哪幾種？哪種發生方式最常見？

答：先芽後根、先根後芽、根芽同步。先芽後根最常見

2.細胞啟動脫分化和再分化在細胞學上的标志性變化是什麼？

答：脫分化：液泡蛋白體出現是啟動脫分化的标志。

再分化：TE細胞的形成和出現極性。

3.離體繁殖中常用的增殖方式有哪些？其中離體繁殖優良品種時應選擇什麼方式增殖？為什麼？

答：芽增殖、體細胞胚增殖、愈傷組織增殖芽增殖，因為變異小，穩定性高

4.什麼是原生質體？原生質體分離前基礎材料預處理的作用是什麼？

動物細胞的原生質體就是細胞，植物細胞的原生質體是指去除細胞壁後的細胞膜包被的所有内含物。增強質膜韌性、降解貯存物質、有利于細胞同步化。

5.哪些因素會影響莖尖培養的脫毒效果？

答：母體材料病毒侵染的程度預處理起始培養的莖尖大小

四.簡述題（每題8分，共計24分）

1.簡述離體無性繁殖的意義。

（1）能夠有效地保持優良品種的特性

（2）快速推廣優良品種

（3）生産無病毒種苗，防止品種退化

（4）節約耕地，提高農産品的商品率

（5）便于運輸

2.簡述培養條件下提高細胞次生産物産量的途徑。

選擇适宜的組織器官作為外植體；注意培養基調整；合理利用前體和激發子。

3.舉例說明如何調整誘導培養和分化培養不同階段的激素和光照條件。

誘導培養：生長素與細胞分裂素平衡，無光照分化培養：低濃度生長素，高濃度細胞分裂素，有光照且有光周期。

五.論述題（共計18分）如何理解植物細胞離體培養時，細胞工程技術本身即包含了雙重性：遺傳穩定性和變異性？舉例說明它們在各種細胞工程技術中的實際指導意義。

從遺傳穩定性是相對的、變異是絕對的，對于單純的繁殖技術而言，離體培養的技術操作是細胞或組織或個體的不斷複制,因而一般來講其繁殖群體具有較好的遺傳穩定性。細胞工程還有一類技術操作，其目的就在于創造變異，如體細胞人工突變、基因轉移、體細胞融合等。這些離體操作技術，在某種程度上說具有一定的目的性和方向性，可以在短期内獲得從自然界可能要經過幾年乃至上百年的進化才能獲得的性狀，從而加速了生物進化的進程。離體培養的環境亦可能誘導變異。

六.設計題（共計18分）現有某一種植物病害，在該植物的現有栽培種中無抗性基因，請你設計一個抗病育種方案并給出技術路線。采用體細胞雜交育種或體細胞突變或克隆基因和轉基因方案均可，要求簡要說明技術要點，并畫出技術路線圖。

試卷四

一.名詞解釋（每題2分，共計10分）

1．細胞工程：利用細胞生物學和分子生物學方法，借助工程學的實驗方法和技術，在細胞水平上改造細胞遺傳特性和生物學特性，獲得特定的細胞、細胞産品或新生物體。

2．細胞脫分化：培養條件下使一個已分化的細胞回複到原始無分化狀态或發生細胞狀态的過程。

3．植物體細胞雜交：将植物原生質體經過人工方法誘導融合，然後進行離體培養，使之再生雜種植株。

4．植物體細胞無性系：離體條件下由任何細胞培養所産生的植株。

5．植物脫毒：利用植物組織培養技術脫除植物細胞中侵染的病毒，生産健康的繁殖材料。

二.選擇題（下列各答案中出一正确答案，其代在答相從題備選選個并将号寫題紙應位置。每小處題1分，共10分。）

1.根的分化需要較高濃度的生長素

2．花藥培養屬于器官培養範疇。

3.通過細胞培養可以獲得三倍體植株。

4.細胞脫分化時，細胞器的變化表現為細胞核移至中央

5.植物組織培養常用的消毒劑中，下面哪種消毒劑對環境有污染，目前已經較少使用？氯化汞。

三.簡答題（每題4分，共計20分）

1.花藥培養時為什麼要用較高濃度蔗糖和較低濃度激素？

抑制體細胞組織分裂，促進花粉細胞分裂，有利于單倍體的獲得。

2.人工種子繁殖體有哪些類型？體細胞胚、微芽和微變态器官。

3.幼胚培養有幾種發育途徑？各有何特點？

胚性發育，一般1各胚再生1株苗；早熟萌發，1各胚可以再生多個苗；愈傷組織途徑，再生多個苗，易産生變異。

4.細胞同步化主要有那些措施？

抑制劑處理法；低溫處理法；分選法；饑餓法。

5.為什麼胚乳培養的再生植株倍性常發生紊亂？胚乳細胞的遺傳特性；高濃度的激素誘導。

四.簡述題（每題8分，共計24分）

1.簡述培養條件下提高細胞次生産物産量的途徑。

篩選高産細胞系；調整培養基；合理利用激發子；合理選擇培養系統。

2.如何理解體細胞胚的遺傳穩定性和群體變異性？就單個體細胞胚而言具有遺傳穩定性；就同一培養體系的體細胞胚群體而言，變異較大。

3.IAA易與氨基酸結合成複合體而失活，2,4-D多以自由态形式存在，因而啟動

細胞分裂的能力較強，NAA界于二者之間。

五.論述題（共計18分）為什麼說細胞工程技術是現代生物技術的橋梁和紐帶（舉例闡述）？從細胞工程與相關學科的關系分析入手，選擇1-2個實例進一步闡述。

六.設計題（共計18分）請設計一個利用細胞工程技術建立遺傳分離群體的實驗方案。花藥培養和花粉培養實驗方案均可，需說明技術要點。

試卷五

一填空題（20分，40Х0.5）

1.植物組織培養的理論基礎是細胞全能性，指分化細胞具有生物個體生長、發育所需要的全部遺傳信息，具有發育成完整個體的潛能。

2.在植物個體發育中，不論是種子發芽、營養生長、繁殖器官形成以至整個成熟過程，主要由激素控制。生長素主要用來刺激細胞分裂和誘導根的分化。分裂素的生理作用主要是引起細胞分裂，誘導芽的形成和促進芽的生長。

3.脫分化後的植物細胞經過細胞分裂，産生無組織結構、無明顯極性的松散的細胞團，稱之為愈傷組織。

4.植物經組織培養的再生途徑主要有器官發生、體細胞胚發生兩條途徑。

5.人工種子結構上從外向裡包括三部分人工種皮、人工胚乳、胚狀體或芽。

6.家畜性别控制方法有受精前、移植前兩條途徑。

7.細胞核移植所得到的動物稱為核質雜種，根據供體細胞不同，有胚胎細胞克隆動物、體細胞克隆動物兩類。

8.動物組織獲得單個細胞與傳代培養常用分散細胞的方法是酶解消化。

9.幹細胞從來源上分為胚胎幹細胞和成體幹細胞、人工誘導多功能幹細胞（IPS），從功能上包括全能幹細胞、多能幹細胞和單能幹細胞。

10.細胞融合的物理、化學、生物方法有電場誘導、PEG誘導和病毒誘導。動物細胞融合在生物制藥中最有代表性的應用是采用雜交瘤技術的單克隆抗體生産。

11.根據培養基與細胞收獲方式不同，細胞培養的操作方式可以分為以下5種：分批、流加、半連續、連續、和灌注培養。産物與細胞生長關系有：偶聯型、中間型、非偶聯型。

12.組織工程三要素是：種子細胞、支架材料、細胞因子。用于組織工程的材料應該具有的兩個最重要的特征是生物相容性和可降解性。

13.毛狀根誘導一般利用的是含有Ri質粒的發根農杆菌，質粒上的T-DNA區可以轉化并插入到植物細胞基因組中。

14.多倍體與單倍體育種屬于染色體工程技術。

二判斷題（10分，1Х1，認為對的打勾，錯的打叉）

1.自然界動物多倍體要比植物多------------------------------（×）

2.三倍體一定是多倍體-------------------------------------（×）

3.體細胞雜交是解決遠源雜交不親和性的有力手段------------------------（√）

4.體外受精與人工授精在操作方面是一樣的---------------------------（×）

5.人胚胎幹細胞建系于1981年---------------------------（×）

6.體細胞雜交可以實現多基因的轉移，比基因工程有優勢--------------------（√）

7.微藻異養比光自養一般可以獲得高的細胞濃度，同時可以使用傳統發酵罐-（√）

8.膠原、聚羟基乙酸、透明質酸是組織工程常用的天然高分子材料---------（×）

9.對于在植物細胞生長平台期大量合成的次級代謝産物可以采用二步法培養工藝制備目标産物---------------------------------------（√）

10.毛狀根培養生産次級代謝産物的培養基中需要添加激素-------------（×）

三簡答題（20分，4Х5）

1.人工種子繁殖植物有什麼優點？

（1）便于運輸和儲藏。

（2）人工胚乳可根據不同植物的要求配制，通過加入植物激素、有益微生物或抗病、抗蟲成分，使人工種子優越于天然種子。

（3）可以固定雜種優勢，加速良種繁育。

（4）可作為植物基因工程和遺傳工程的載體。

（5）可保存珍貴稀有植物品種。

（6）利于快速繁殖，生産效率高。

2.微藻培養生産生物制品有哪些優點？

(1)利用太陽能和CO2通過光合作用生産有機物，生長速度快、效率高、能耗低。(2)微藻提取有效成分不需要複雜的前處理。

(3)種類多，許多微藻可産生有生理活性的化合物。

(4)可以利用貧瘠土地、鹽堿地等極端環境。

(5)微藻培養簡單，容易産業化。

3.動物細胞微載體生物反應器培養有哪些優點？

（1）模拟了體内三維生長環境，減輕了接觸抑制，可以多層生長。

（2）很好地解決了生物反應器的空間分布問題，單位體積培養液的細胞産率高；培養系統占地面積和空間小；勞動強度小；放大容易，使大規模培養動物細胞成為可能。

（3）把懸浮培養和貼壁培養融合在一起，兼有兩者的優點；可以稍加改造利用傳統生物反應器。

（4）接種與收獲方便；可循環、連續收獲與培養，培養基利用率較高。

4.簡述核移植動物培育的技術流程。

（1）核供體細胞的準備

（2）受體細胞的去核

（3）細胞核移植、激活

（4）重組胚的培養與移植

（5）核移植後代的鑒定

5.什麼是體細胞雜交？在植物育種中有怎樣的意義？

體細胞雜交（Somaticcellhybridization）是指将不同來源的體細胞融合并使之分化再生、形成新品種的技術。利用體細胞雜交技術可以克服一些遠緣雜交的困難，更加廣泛地組合起不同物種的優良遺傳性狀，從而培育出理想的新品種。

6.簡述雜交瘤技術生産單克隆的原理。

将體外培養的小鼠骨髓瘤細胞與綿羊紅細胞免疫小鼠脾細胞（B淋巴細胞）進行融合，融合形成的雜交瘤細胞具有雙親細胞的特征：既能像骨髓瘤細胞一樣在體外無限地增殖，又能持續地分泌特異性抗體，通過克隆化培養獲得純的細胞就可以生産高純度的單克隆抗體（McAb）。

三論述題（10分，10Х1）

比較分析植物細胞培養與組織培養的異同以及在生産次級代謝産物方面的優缺點。

植物細胞培養對象是植物細胞，而組織培養對象是植物組織，前者可以使用稍加改造的傳統生物反應器，後者需要特殊設計生物反應器。

植物細胞培養

優點：

（1）不受季節、地域、氣候和有害生物影響，培養條件可控；

（2）可以使用傳統的生物反應器，借鑒微生物發酵的成熟技術；

（3）細胞培養相對比容易，容易放大；

（4）細胞水平上的調控相對比較容易；

（5）産物分離提取容易。

缺點：

（1）缺乏适合大規模生産的細胞株，細胞多次傳代後穩定性差；

（2）合成的産物種類有限，濃度較低；

（3）需要激素等調控因子，成本高；

（4）對産物相關積累的機制途徑尚不很清楚，很難維持最佳培養條件。

植物組織培養

優點：

（1）不受季節、地區、氣候和有害生物影響，培養條件可控；

優點：

（2）遺傳性狀相對穩定，具有較穩定的次級代謝産物的合成能力；

（3）分化程度高，可産生高度分化的細胞合成的次生代謝産物，例如根、葉中合成的代謝産物；

（4）激素自養型，成本低；生長速度快。

缺點：

（1）需要特殊設計的生物反應器培養系統，存在尚未解決的工藝技術問題；

（2）需要特殊的培養、接種、取樣技術，放大困難；

（3）調控相對比較困難；産物分離提取較複雜；

（4）對産物相關積累的機制途徑尚不很清楚，很難維持最佳培養條件。

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