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T載體的作用以及克隆時為什麼要用T載體

圖文 更新时间:2024-10-12 07:22:31

T載體的作用以及克隆時為什麼要用T載體?T載體又叫T質粒載體,是指T4噬菌體DNA連接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的連接緩沖系統中,将分别經酶切的zd載體分子與外源DNA分子進行連接,現在小編就來說說關于T載體的作用以及克隆時為什麼要用T載體?下面内容希望能幫助到你,我們來一起看看吧!

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T載體的作用以及克隆時為什麼要用T載體

T載體又叫T質粒載體,是指T4噬菌體DNA連接酶,作用是在有Mg2 、ATP存在的連接緩沖系統中,将分别經酶切的zd載體分子與外源DNA分子進行連接。

DNA連接酶有兩種:T4噬菌體DNA連接酶和大腸杆菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有将兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能,而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸杆菌DNA連接酶沒有的特性,即能使兩個平末端的雙鍊DNA分子連接起來。

T4噬菌體DNA 連接酶催化DNA 連接反應内分為3 步:首先,T4 DNA 連接酶與輔因子ATP形成酶-ATP複合物;然後,酶-ATP複合物再結合到具有5’磷酸基和3’羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化;最後産生一個新的磷酸二酯鍵,把切口封起來。連接反應通常将兩個不同大小的片斷相連。

形象的說,DNA水解酶相當于剪刀,剪斷DNA,而T載體容(DNA連接酶)就相當于針線。如果克隆時不用,就不能将DNA連接起來。

T載體是聚合酶鍊反應産物的克隆運載體,線性化後兩側3′端各多出一個脫氧胸苷酸(T)。由于PCR産物兩側3′端通常含單個脫氧腺苷酸(A),與T載體之間的A-T互補性可提高PCR産物克隆的效率。

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