将某一真菌與自然界的其它真菌分離開,而成為單一的純菌株,就是菌種分離。要栽培食用菌,就要首先得到所要栽培菌的。分離工作應該是在很清潔的無菌環境下進行。無菌操作間或無菌操作箱,是不可缺少的設備。無菌操作間或無菌操作箱在工作前,事先要進行滅菌和消毒處理,通常是先在室内噴灑水霧以消除懸浮在空氣中的塵埃及微生物,然後配制2%的煤酚皂液,或1:40福爾馬林溶液噴酒消毒,或者可用高錳酸鉀加上乳酸後産生蒸汽消毒。無菌操作室中或無菌操作箱内裝置紫外光燈,則更能保證其滅菌狀态。
除工作環境外,工作人員應保持自身的清潔,在工作前應用肥皂水洗手,有條件時應穿上滅菌後的工作服并帶日罩。對分離材料處理:因食用菌有特殊的子實體,所以分離菌種時可利用其子實體進行直接分離,在分離前要将材料進行無菌處理。外表消毒用75%的酒精擦外表或用0.2%的升汞液浸泡3~ 5分鐘,再用無菌水沖洗7 ~ 8次,以達到分離材料外表不帶雜菌。具體分離有下列3種方法:
(1).組織分離法 選擇子實體肥大,無病蟲害,經濟性狀好,産量高,質量好的個體作為分離材料,用小刀在子實體上取一小塊菌肉,移放在斜面培養基中央,放在25一27℃的恒溫箱中培養2~3天,組織塊上長出白色菌絲,移植到斜面進行純化培養。當菌絲長滿培養基後,再移植純化到新的培養基中,培育成母種。
(2.)孢子分離法 把采選的子實體用無菌水沖洗數次,用無菌紗布吸去表面水分,在接種箱中用經過消毒的鋼絲鈎上,懸挂或懸空于錐形瓶或鐘罩中,送入恒溫箱中保持20--26℃的溫度,培養1~2天後,就看到培養基上有微暗的灰粉出現,就把子實體移出,讓孢子在培養基上發育成菌絲,再移到試管培養基上,即得到母種。
(3.)基質分離法 又稱為寄主分離,是從食用菌着生的原基上,取一段木頭,從段木中分離提取菌絲,經純化培養後,獲得菌種。方法是把子實體着生部位去皮截取一塊木頭,用0.2%的升錄液浸過,用無菌水沖洗、擦幹,用刀刮去表層,切割火柴杆粗細的一點,放入三角瓶内,經5天培養就看到小木塊周圍白色的菌絲,待蔓延後,再經純化轉到新的培養基進行培養,即得到純淨的菌種,但必須進行出菇觀察試驗。
(4)擴大培養 我們用上述3種分離法得到的純菌經出菇試驗觀察,可按生産規模及栽培研究的需要,擴大對菌種的繁殖。
5.原種的制備:
将分離得到的母種,放入木屑培養基中進行擴大培養即成原種。木屑培養基成份:闊葉木屑75%,細米糠(或麥獲)22%,糖1.5%,石膏粉1.5%。加入适量清水,除松、杉、柏、樟等樹木的木屑含有對香菇菌絲生長有害的樹脂、樹脂酸、精油等物質不能直接利用外,其它闊葉樹木的木屑一.般均可使用。目前多用棉子殼、甘蔗渣、麥稈草等代替木屑使用的。
制法:木屑、麥麸、石膏粉按上述比例拌勻;然後加入已溶有糖的水,攪拌均勻,使培養基含水量達到60--65%。攪拌好後即可裝瓶,培養料裝入瓶中邊用力振動瓶子,同時用扁形鐵鈎将培養料表面壓平,料至瓶肩,用水洗去瓶内外之未屑,并用一圓木棒将瓶内培養料打一洞至瓶底。然後瓶口塞好棉塞并包上牛皮紙及時進行高壓滅菌。一般在17磅壓力滅菌1小時。在沒有高壓滅菌鍋時,也可用木慨子連續蒸7~ 8小時也可達到滅菌目的。
滅過菌的瓶子或培養料,待冷卻後放入接種室(箱)内,在無菌操作的條件下将斜料面上長好的母種接人木屑培養料,約接1厘米的種量為宜,接好種置于20--25℃下培養。生長正常的情況下約一個月左右菌絲就可長到瓶底部或長滿整個培養料塊。将長滿菌絲的木屑培養基移至陰涼通風處放置,這就是食用菌的原種。一般在低溫下可保存4--6個月。在生産上需要原種量較大,一般可用原種再接到木屑培養料上進行擴大原種生産,一瓶原種可擴大接種到70--100瓶,由原種擴大生産的菌種為栽培種。
2.菌種的保存方法
食用菌種的保存是一重要的問題。保存的目的是為以後繼續研究和生産上的應用,因此,保存的方法是使菌種在長期内置放不緻于死去,同時還要盡可能使菌種能保持原有性狀。菌種保存的方法很多,可根據研究或生産應用的需要,要求保存時間的長短,菌種本身情況,靈活選擇其方法:
(1)臨時保存法對于暫時還不接種的菌種可采用,将酒種移植在斜面試管中,待菌落充分生長後,用軟木塞或橡皮塞将管口塞緊,這樣可以較長時期培養基不緻幹燥,用起來也很方便。
(2)冰箱保藏法将菌種接種在固體斜面培養基上,待菌落充分生長後,放在4℃的冰箱中進行保藏。每隔一定時間轉接一次。一般用這種方法可以保存半年左右。
(3)地窯保藏法挖一米深的地窖,窖内放一個缸,在大缸内再放一個小瓦缸,在大小瓦缸間隙周圍放河沙,用井水把河沙浸濕。井水要經常更換。在小缸中放幾個大口瓶,把要保存菌種放入大口瓶中,然後蓋上玻璃瓶口,蓋好缺口保存時間約3個月到半年。
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