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熒光抗體免疫标記實驗步驟

生活 更新时间:2024-11-19 17:30:11

熒光抗體免疫标記實驗步驟?1.固定:去除殘留液體,用1X PBST清洗接種在幹淨玻片上的細胞3次,每次3min在室溫下用新鮮配制的4%多聚甲醛固定15min,今天小編就來聊一聊關于熒光抗體免疫标記實驗步驟?接下來我們就一起去研究一下吧!

熒光抗體免疫标記實驗步驟(免疫細胞化學染色實驗操作流程)1

熒光抗體免疫标記實驗步驟

1.固定:去除殘留液體,用1X PBST清洗接種在幹淨玻片上的細胞3次,每次3min。在室溫下用新鮮配制的4%多聚甲醛固定15min。

2.1XPBST漂洗三次:去除固定液,1XPBST漂洗3次,每次5min。

3.透化:在1XPBST中加0.1% Triton X-100,孵育20分鐘以提高通透性。

4.1XPBST漂洗三次:去除殘留液體,1XPBST漂洗3次,每次5min。

5.封閉:去除殘留液體,在切片上加5% BSA或血清。确保血清與二抗來源于相同物種。然後在室溫下孵育20min。

6.孵育一抗:去除殘留液體,用适當稀釋比例的一抗覆蓋組織部位,4oC過夜孵育。

7.複溫:将切片從4oC移至室溫靜置約20min,不要立即沖洗切片。

8.1XPBST漂洗三次:去除殘留并浸泡在PBST中,在搖床中以40 RPM漂洗5 min,重複3次。

9.孵育熒光偶聯的二抗:去除殘留液體,用适當稀釋比例的二抗覆蓋組織部位,4℃避光孵育60 min。

10.1XPBST漂洗三次:去除殘留并浸泡在PBST中,在搖床中以40 RPM漂洗5 min,重複3次。

11.滴加50% PBS 50% 甘油于玻片上,立即置于顯微鏡下觀察。

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