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什麼是大分子蛋白純化

生活更新时间:2024-07-21 01:17:02

什麼是大分子蛋白純化?蛋白質在等電點時，因為沒有相同電荷而互相排斥的影響，所以最不穩定，溶解度最小，極易借靜電引力迅速結合成較大的聚集體，因而沉澱析出同時蛋白質的黏度、滲透壓、膨脹性以及導電能力均為最小，下面我們就來聊聊關于什麼是大分子蛋白純化?接下來我們就一起去了解一下吧!

什麼是大分子蛋白純化

蛋白質在等電點時，因為沒有相同電荷而互相排斥的影響，所以最不穩定，溶解度最小，極易借靜電引力迅速結合成較大的聚集體，因而沉澱析出。同時蛋白質的黏度、滲透壓、膨脹性以及導電能力均為最小。

當外界溶液的pH>pI值，兩性離子釋放質子帶負電。

當外界溶液的pH<pI值，兩性離子質子化帶正電。

當達到等電點時氨基酸在溶液中的溶解度最小。

PS：pH值在4-8（SP，CM）(常用磷酸鹽,乙酸鈉和Hepes等50mM)或者5-9（Q，DEAE，ANX）範圍内(常用Tris,20mM)，同時緩沖液之間具有0.5-1個pH單位間隔

對于Q，DEAE，ANX帶電基團的填料，避免使用陰離子的去污劑。對于SP，CM帶電基團的填料，避免使用陽離子去污劑

通常情況下，緩沖液與PI至少相差0.5個單位；

在純化的過程中離子交換層析緩沖液的設計：

1）陰離子交換柱（柱子填料為陽離子性質）

I）使用陽離子型緩沖液體系（否則會與填料相互作用）；

II）緩沖液pH高于目的蛋白pI約0.5-1個單位；

III）增加pH可以提高結合的強度。

2）陽離子交換

I）使用陰離子型緩沖體系（否則會與填料相互作用）；

II）緩沖液pH低于目的蛋白pI約0.5-1個單位；

III）降低pH可以提高結合的強度。

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