什麼是大分子蛋白純化?蛋白質在等電點時,因為沒有相同電荷而互相排斥的影響,所以最不穩定,溶解度最小,極易借靜電引力迅速結合成較大的聚集體,因而沉澱析出同時蛋白質的黏度、滲透壓、膨脹性以及導電能力均為最小,下面我們就來聊聊關于什麼是大分子蛋白純化?接下來我們就一起去了解一下吧!
蛋白質在等電點時,因為沒有相同電荷而互相排斥的影響,所以最不穩定,溶解度最小,極易借靜電引力迅速結合成較大的聚集體,因而沉澱析出。同時蛋白質的黏度、滲透壓、膨脹性以及導電能力均為最小。
當外界溶液的pH>pI值,兩性離子釋放質子帶負電。
當外界溶液的pH<pI值,兩性離子質子化帶正電。
當達到等電點時氨基酸在溶液中的溶解度最小。
PS:pH值在4-8(SP,CM)(常用磷酸鹽,乙酸鈉和Hepes等50mM)或者5-9(Q,DEAE,ANX)範圍内(常用Tris,20mM),同時緩沖液之間具有0.5-1個pH單位間隔
對于Q,DEAE,ANX帶電基團的填料,避免使用陰離子的去污劑。對于SP,CM帶電基團的填料,避免使用陽離子去污劑
通常情況下,緩沖液與PI至少相差0.5個單位;
在純化的過程中離子交換層析緩沖液的設計:
1)陰離子交換柱(柱子填料為陽離子性質)
I)使用陽離子型緩沖液體系(否則會與填料相互作用);
II)緩沖液pH高于目的蛋白pI約0.5-1個單位;
III)增加pH可以提高結合的強度。
2)陽離子交換
I)使用陰離子型緩沖體系(否則會與填料相互作用);
II)緩沖液pH低于目的蛋白pI約0.5-1個單位;
III)降低pH可以提高結合的強度。
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