tft每日頭條

 > 生活

 > 檢測蛋白質的方法有哪些

檢測蛋白質的方法有哪些

生活 更新时间:2024-11-29 08:38:27

  1、凱氏定氮法

  凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品将有機氮都轉變成無機铵鹽,然後在堿性條件下将铵鹽轉化為氨,随水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收,再以标準鹽酸滴定,就可計算出樣品中的氮量。

  由于蛋白質含氮量比較恒定,可由其氮量計算蛋白質含量,故此法是經典的蛋白質定量方法。

  2、雙縮脲法

  雙縮脲法是一個用于鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個堿性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制。

  當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

  3、酚試劑法

  取6支試管分别标号,前5支試管分别加入不同濃度的标準蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,不加标準蛋白溶液,在室溫下放置30分鐘,以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照,于650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

  4、紫外吸收法

  大多數蛋白質在280nm波長處有特征的最大吸收,這是由于蛋白質中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于測定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

  取9支試管分别标号,前8支試管分别加入不同濃度的标準蛋白溶液,1号試管不加标準蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,而不加标準蛋白溶液,每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一緻,将液體混合均勻,在280nm波長處進行比色,記錄吸光度值。

  5、考馬斯亮藍法

  考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後,其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

  在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恒定的情況下,當溶液中的蛋白質濃度不同時,就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式,而且這種轉變有一定的數量關系。

  一般情況,當溶液中的蛋白質濃度增加時,顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加,因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。

更多精彩资讯请关注tft每日頭條,我们将持续为您更新最新资讯!

查看全部

相关生活资讯推荐

热门生活资讯推荐

网友关注

Copyright 2023-2024 - www.tftnews.com All Rights Reserved