選擇限制酶的兩個依據
(1)根據目的基因兩端的限制酶切割位點确定限制酶的種類
①應選擇切割位點位于目的基因兩端的限制酶,不能選擇切割位點位于目的基因内部的限制酶。
②為避免目的基因和質粒的自身環化和随意連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒 (但要确保質粒上也有這兩種酶的切割位點)。
(2)根據質粒的特點确定限制酶的種類
①切割質粒和目的基因的限制酶一緻,以确保産生相同的黏性末端。
②質粒上有标記基因等,所選限制酶盡量不要破壞這些結構。
③如果所選限制酶的切割位點不止一個,則切割重組後可能丢失某些片段,若丢失的片段含複制起點區,則切割重組後的片段進入受體細胞後不能自主複制。
(1)利用RNA獲得cDNA的過程為逆轉錄。(2)根據啟動子和終止子的生理作用可知,目的基因應導入啟動子和終止子之間。
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