制種注意事項

羊肚菌的菌種性能與其它食用菌不同，菌種分離方法和育種手段及栽培管理技術與其它食用菌也有很大差異。最大的缺點就是容易退化、變異、生黴。這對栽培羊肚菌帶來很大困難。對此，首先要控制菌種傳代，無論母種、原種、栽培種，若違反技術要求，多傳一代就會出現上述不良反應或不長子實體。母種隻能經過原種栽培種，到栽培中的一次流程和3次破菌愈合才能保住質量；若超過3次菌絲斷裂而重新萌發的新菌絲，會失去或降低酶的分解作用，以緻抗病力差，易生雜菌，不出菇。

母種的制作

1、培養基配方

①、黃豆芽500克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，羊肚菌基腳～50克，水1升。

②、黃豆芽500克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，水1升。

③、栎木屑500克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，水1升。

④、馬鈴薯200克（煮汁），白糖20克，瓊脂20克，蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，水1升。

⑤、蛋白胨1克，葡萄糖20克，瓊脂20克，酵母膏1克，磷酸二氫鉀1克，硫酸鎂1克，維生素B1，1克，水1升。pH值自然。

上述配方任選一組。将木屑或豆芽加水1升煮30分鐘，過濾取汁，并将餘下的水補足1升，加入其它原料，煮至溶化後，按母種制作常規方法，分裝于18毫米×180毫米或20毫米×200毫米試管的1/5，塞上棉塞，使用高壓滅菌鍋徹底滅菌；在0.68千克壓力下維持60分鐘，自然冷卻至指針回到原位才可打開，放成斜面備用。

2、菌種分離

首先要具有食用菌專業基礎知識、多年的菌種分離經驗及菌絲鑒别能力，其次要購置母種培養基、無菌接種箱、恒溫培養箱、冰箱、高倍顯微鏡等必要設備。根據當地羊肚菌生長季節，趁羊肚菌生長旺盛時做菌種分離工作。

①、分離方法

羊肚菌的分離方法與其它食用菌大不相同。它需要一種助生菌與羊肚菌菌絲共生時才能出菇。這種助生菌長期活動在土壤中，有時以芽孢菌形式出現，有時以菌絲形式出現。它為羊肚菌的原基形成和子實體生長發育起着至關重要的作用。因此，從土壤中分離該菌比其它任何方式分離要好些。但從土壤分離難度太大，成功率不到萬分之一，并且難以分辨，所以隻有采取羊肚菌基腳土分離，才能真正找到羊肚菌的出菇菌絲。初學者可在四川綿陽市食用菌研究所購買培養好的羊肚菌優良母種，并參加現場培訓。

②、操作過程

在羊肚菌生長的周圍，可見白色菌絲充滿土壤。從土壤中挑選這種菌絲容易成功。現介紹兩種土壤分離的簡易方法：一種是土壤直接分離，另一種是浸提分離。土壤直接分離法：在羊肚菌生長的地方去掉羊肚菌，取周圍5厘米以内的土壤，去掉表層，把土壤放入無菌接種箱内，然後放入試管培養基，進行接種箱空間消毒。即按接種箱每立方米空間用甲醛10毫升，高錳酸鉀5克，混合産生氣體消毒，半小時後才可操作。将基腳土用接種針挑取黃豆大小一塊，迅速放到試管内的空白培養基上，每管放一塊，塞上棉塞，接種後取出培養。浸提分離法：将基腳土用無菌水稀釋，澄清後用接種針蘸取少量溶液，滴到試管内的空白培養基上，塞上棉塞後取出培養。

分離後，放在12～18℃溫度下培養觀察。3天後培養基上萌發菌絲，每天仔細檢查每支試管的發菌及變化情況。區分和認識各類雜菌是最關鍵的核心技術。真正的羊肚菌菌絲最初為灰白色，生長很快，時間長會變成棕黃色，有時會出現菌核，母種7天長滿試管，原種、栽培種15天可長滿瓶底。是否分離成功，必須做栽培出菇試驗，待出菇後才能準确認定是否羊肚菌的菌種。一旦菌種分離成功，在以後的轉接過程中要小心，不能再讓雜菌感染，必須把好高溫滅菌關和接種消毒關，才能保證菌種質量和成活率。

3、轉接提純

待培養基表面餘水幹後才能使用，否則會被細菌感染。接種要求在接種箱内通過藥物滅菌進行，将第一代純母種挑取黃豆大一塊帶菌絲的培養基，放入空白培養基上，每支母種可接10～15支，母種隻能擴種一次，不能多接或多擴，否則會影響子實體生長。

4、培養

接種後放在18～22℃溫度下避光培養，2～3天菌絲萌發，7天可長滿斜面培養基。如不使用則放入冰箱在0～3℃溫度下保存，時間最長不超過半年。

原種制作

1、培養基配方

①、栎木屑50%，棉籽殼30%，麥麸 15%，白糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%，土2%，pH值自然。

②、栎木屑75%，米糠或麥麸20%，白糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%，土2%，pH值自然。

③、稻草粉70%，麥麸25%，石膏1.5%，過磷酸鈣1.5%，土2%，pH值自然。

④、棉籽殼90%，木屑8%，土2%，pH值自然。

⑤、玉米芯50%，木屑30%，米糠15%，石膏1%，過磷酸鈣1%，土3%，pH值自然。

2、操作過程

按配方将原料混合均勻，加入清水，使含水量達65%時裝瓶。裝瓶要求松緊一緻，裝至瓶肩，将表面壓平，洗去瓶壁内外沾染的培養基，塞上棉塞，或用塑料薄膜封口。

3、滅菌

高壓滅菌在0.68千克壓力下維持1小時，常壓滅菌在100℃溫度下保持6～8小時。滅菌時間不能過長或壓力過高，否則會破壞其中養分。

4、接種與培養

接種在接種箱内經消毒後，每支母種可接種原種5～10瓶。接種後放在18～22℃溫度下避光培養，3天菌絲萌發吃料，10天菌絲布滿培養基表面，15～20天菌絲長滿瓶底。培養期間盡量避免強光刺激，菌齡以不超過50天為好。菌絲壽命與溫度有關，超過30℃以上幾小時就死亡。

栽培種制作

1、培養基配方

①、栎木屑75%，米糠或麥麸20%，白糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%，土2%，pH值自然。

②、棉籽殼75%，麥麸20%，石膏1%，過磷酸鈣1%，土3%，pH值自然。

③、稻草粉75%，麥麸15%，過磷酸鈣2%，土3%，pH值自然。

④、玉米芯80%，米糠15%，石膏2%，過磷酸鈣1%，土2%，pH值自然。

⑤、農作物藤稈粉75%，米糠10%，麥麸10%，白糖1%，石膏1%，過磷酸鈣1%，土2%，pH值自然。

2、操作過程

按配方将原料混勻後，加水調至含水量為65%，裝瓶，滅菌接種，培養。操作方法同上述原種。經1個月菌絲長滿瓶後就可用于生産栽培。

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