熒光定量檢測 熒光定量檢測根據所使用的标記物不同可分為熒光探針和熒光染料。熒光探針又包括Beacon技術(分子信标技術，以美國人Tagyi為代表)、 TaqMan探針(以美國ABI公司為代表)和FRET技術(以羅氏公司為代表)等;熒光染料包括飽和熒光染料和非飽和熒光染料，非飽和熒光染料的典型代 表就是現在最常用的SYBR GreenⅠ;飽和熒光染料有EvaGreen、LC Green等。

　　熒光定量PCR原理 熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR，後來也叫Real-Time PCR，是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光标記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理： 随着PCR反應的進行，PCR反應産物不斷累計，熒光信号強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信号，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測 産物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。

　　熒光定量PCR的應用 分子生物學研究

　　1.核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉基因動植物基因拷貝數的檢測，RNAi 基因失活率的檢測等。

　　2.基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學處理等 ) ，特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的确證

　　3.SNP 檢測。檢測單核苷酸多态性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有着重要的意義，因分子信标結構的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用這種技術進行高通量的 SNP 檢測将會變得簡單而準确。

　　4.甲基化檢測。甲基化同人類的許多疾病有關，特别是癌症， Laird 報道了一種稱作 Methylight的技術，在擴增之前先處理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman探針來區分甲基化和非甲基化的 DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。

　　醫學研究

　　5.産前診斷：人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法治療，到目前為止，還隻能隻能通過産前監測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發生，如為減少 X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測其Y性别決定區基因是一種無創傷性的方法，易為孕婦所接受。

　　6.病原體檢測：采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純疱疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、 結核分枝杆菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優點。

　　7.藥物療效考核：對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關系。HCV高水平表達，幹擾素治療作用不敏感，而HCV低滴度，幹擾素作用敏感;在拉米夫定治療過程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，随後若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發生變異。

　　8.腫瘤基因檢測：盡管腫瘤發病的機理尚未清楚，但相關基因發生突變是緻癌性轉變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出 現。實時熒光定量 PCR不但能有效地檢測到基因的突變，而且可以準确檢測癌基因的表達量。目前用此方法進行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細胞性白血病WT1基因、腫瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關的病毒基因等多種基因的表達檢測。

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