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crisprcas9的原理

知識 更新时间:2025-01-21 09:35:12

  此系統的工作原理是crRNA(CRISPR-derivedRNA)通過堿基配對與tracrRNA(trans-activatingRNA)結合形成tracrRNA/crRNA複合物,此複合物引導核酸酶Cas9蛋白在與crRNA配對的序列靶位點剪切雙鍊DNA。而通過人工設計這兩種RNA,可以改造形成具有引導作用的sgRNA(singleguideRNA),足以引導Cas9對DNA的定點切割。

  作為一種RNA導向的dsDNA結合蛋白,Cas9效應物核酸酶是已知的第一個統一因子(unifyingfactor),能夠共定位RNA、DNA和蛋白,從而擁有巨大的改造潛力。将蛋白與無核酸酶的Cas9(Cas9nuclease-null)融合,并表達适當的sgRNA,可靶定任何dsDNA序列,而sgRNA的末端可連接到目标DNA,不影響Cas9的結合。因此,Cas9能在任何dsDNA序列處帶來任何融合蛋白及RNA,這為生物體的研究和改造帶來巨大潛力。

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