主要考慮是否在模闆稀釋過程中出現問題,是否存在高濃度樣品污染低濃度樣品的情況。具體的要看擴增曲線、溶解曲線以及标準曲線的結果才能判斷。其次題主提到的兩個問題:
模闆濃度過高會抑制PCR反應,可能會導緻擴增效率降低。但同時可能會出現非特異性擴增導緻結果的Ct值不可信,最終導緻擴增效率不可信。在一定範圍内提高退火溫度不會太影響擴增效率。
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