為了增進實驗室小白的基礎知識積累，使自己具備專業的知識和過硬的技術，這些食品微生物學基礎實驗常見問題，來學習一下吧！

1.食品檢驗為什麼要測定細菌菌落總數?

答:測定細菌菌落總數是檢驗食品純度程度的指标，也是判斷其保存能力的指标。

2.食品中檢出的菌落總數是否代表該食品上的所有細菌數?為什麼？

答: 不能代表該食品上所有細菌菌數。因為在實驗過程中會造成細菌的損失或死亡，食品上的細菌包括了各種各樣的微生物。

3.為什麼營養瓊脂培養基在使用前要保持(46士1)℃的溫度?

答：因為營養瓊脂溫度，若溫度高于(46士1)℃ 容易将驗樣中的菌燙死；若溫度低于(46士1) ℃則營養瓊脂會凝固，影響培養效果。

4.大腸菌群檢驗中為什麼首先要用乳糖膽鹽發酵管?

答: 因為乳糖膽鹽發酵管中的成分有溴甲酚紫，中性時呈藍紫色，酸性時呈黃色。如果顔色不變(量藍紫色)，說明無産酸的大腸菌群；如果顔色變黃色，說明可能出現能分解乳糖産酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細菌生長繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖産酸産氣的大腸自群。

5.做空白對照實驗的目的?

答:目的是檢驗培養基是否受到污染，驗證無菌操作。

6.為什麼大腸菌群的檢驗要經過複發酵才能證實？

答:初發酵是樣品的發酵結果，不是大腸菌群純菌的發酵試驗，有可能受其它雜菌影響判斷結果。進行證實實驗避免假陽性結果。

7.複發酵為什麼使用乳糖發酵管但不需加膽鹽?

答: 膽鹽能抑制革蘭氏陽性菌等雜菌生長，在初發酵培養基已經加入膽鹽抑制革蘭氏陽性菌生長，并在EMB培養基上進行分離培養，因此複發酵培養時無需乳糖發酵管，以免大腸菌群受到抑制。

8.用油鏡觀察時應注意哪些問題?在載玻片和鏡頭之間加滴什麼油?起什麼作用?

答:應要擦掉油加香柏油，作用是增加折光率,也就是增加了顯微鏡的分辨率。油的折光率和分辨率成反比(有公式),同時與波長成正比。

9.比較低倍鏡、高倍鏡及油鏡各方面的差異。為什麼在使用高倍鏡及油鏡時應特别注意避免粗調節器的誤操作？

答:使用高倍鏡和油鏡時鏡頭距高标本較近，而粗調節器的調節幅度較大，粗調節器的誤操作會使鏡頭大幅度向标本移動，很容易損壞标本和鏡頭。一般先用低倍鏡找到物象後換到高倍鏡，就隻需要用細調節器了。

10.什麼是物鏡的同焦現象?它在顯微鏡觀察中有什麼意義?

答:在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦後轉動物鏡轉換器将其他物鏡轉到工作位置進行觀察時，物像将保持基本準焦的狀态。這種現象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數高、工作距離短的物鏡時僅用細調節器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調節器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。

11.影響顯微鏡分辨率的因素有那些?

答:物鏡的NA值（物鏡的數值孔徑)與照明光源的波長。

12.應如何根據所觀察微生物的大小，選擇不同的物鏡進行有效地觀察？

答:細菌用油鏡，真菌用高倍鏡。都是先用低倍鏡找到目标後，再用高倍鏡太調到合适的視野和合适的清晰度。

如：放線菌、酵母菌、多細胞真菌相對較大，用放大40倍的物鏡就可以看了；細菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小；病毒那就要用電子顯微鏡看了。

13.那些環節會影響革蘭色染色結果的正确性?其中最關鍵的環節是什麼?

答:塗片環節、加熱固定環節、脫色環節，其中最關鍵的環節是脫色環節。

14.進行革蘭氏染色時。為什麼特别強調菌齡不能太老。用老齡細菌染色會出現什麼問題?

答:着色不均，染色效果不好；陰性陽性不明顯，分不太清楚，問題是不便于顯微鏡下觀察是陽性茵還是陰性菌。

15.革蘭氏染色時，初染前能加碘液嗎?乙醇脫色後複染之前，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性茵應分别是什麼顔色?

答:不可以。因為碘與染料會結合成大分子，使得染料分子不能穿過細胞的細胞壁，對實驗結果造成影響。脫色後、複染前，革蘭氏陽性菌呈紫色，陰性菌無色。

16.不經過複染這一步，能否區别革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌?

答:不行。在複染之前，革蘭氏陰性菌是無色透明的。在顯微鏡下很難觀察到或者脫色過度，也會造成陽性菌脫色。不經過複染，無法進一步區别。

17.為什麼要求制片完全幹燥後才能用油鏡觀察?

答：1.若未完全幹燥載玻片上的液體會污染油鏡鏡頭，鏡頭非常精密被污染後不利于下次觀察。2.若未完全幹燥，水滴會影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。

18.如果塗片未以熱固定将會出現什麼問題?加熱溫度過高、時間太長，又會怎麼樣呢?

答：如果沒有加熱固定的話，水分蒸發太慢或者在染色時菌體會被沖洗掉；如果加熱時間過久，菌體變形或形态破壞，無法染色。

19.制各培養基的一般程序是什麼?

答:稱量一一溶解——調pH值——融化瓊脂——過濾分裝——包紮标記——滅菌一一倒幹闆。

20.做過實驗後，你認為在制各培養基時應注意些什麼問題?

答:溶解配料的水要适量；pH要調節合适；要小心手提式高壓鍋的使用；倒平闆時要防止培養基被污染。

21.滅菌在微生物學實驗操作中有何重要意義?

答:防止培養基被污染；防止雜菌影響實驗結果。

22.試述高壓蒸汽滅菌的操作方法和原理？

答:高壓滅菌的原理是:在密閉的蒸鍋内，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋内溫度也随之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋内溫度達121℃，在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。

操作方法: 加水——裝料、加蓋一一排氣一一升壓、保壓和降壓一一取料

23.高壓蒸汽滅菌時應注意哪些事項?

答:第一：無菌包不易過大，不易過緊，各包裹間要有間隙，使蒸汽能對流易滲透到包裹中央。第二：布類物品應放在金屬類物品上，否則蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮，阻礙蒸汽進入包裹中央，嚴重影響滅菌效果。第三：定期檢查滅菌效果。

24.如何确定平闆上某單個菌落是否為純培養?

答:通過觀察菌落特征；單個菌落再次劃線分離。

25.試述如何在接種中，貫徹無菌操作的原則?

答:保持操作台的無菌狀态與在無菌室操作；操作前，要進行手的消毒；接種環要加熱滅菌；接種物品要标記。

26.為何要用乳酸-石炭酸溶液作黴菌水浸片?

答:用乳酸-石炭酸的優點是可使細胞不變形，具有殺菌、防腐作用；不易幹燥，能保持軟長時間；能防止孢于四處飛散。

27.比較黴菌菌絲與假絲酵母菌絲的區别

答:假絲酵母是指能形成假菌絲、不産生子囊孢子的酵母。假菌絲沒有橫隔，各細胞間僅以狹小的面積相連，呈藕節狀，在分隔處溢縮。黴菌的菌絲大多有橫隔， 整個菌絲的直徑粗細胞直徑一緻，且分枝與主于的直徑一緻；菌絲頂端常呈鈍圓形，相連細胞間的橫隔面積與細胞直徑一緻，是竹節狀的細胞串。假菌絲與真茵絲明顯不同處在于其兩細胞間有一細腰，而不象直正菌絲橫隔處兩細胞寬度一緻。

28.細菌與酵母菌的菌落有何區别？

答:細菌菌落光滑，易于基質脫離；酵母菌菌落較細菌菌落大而厚且酵母菌的菌落較濕潤。

29.為什麼随着顯微鏡放大倍數的改變。目鏡測微計每格相對的長度也會改變?能找出這種變化的規律嗎?

答:因為目鏡測微尺所測量的是微生物細胞經地顯微鏡放大之後所成像的大小；規律是刻度實際代表的長度随使用的目鏡和物鏡放大倍數及鏡簡的長度而改變。

30.根據測量結果。為什麼同種酵母菌的菌體大小不完全相同?

答:菌株之間的生長期不同；受環境的影響；遺傳的基因表達不完全一緻。

31.能否用血球計數闆在油鏡下進行計數?為什麼?

答:不能。計數時滴在血球計數闆上的是懸菌液，相當于在鏡頭和計數闆直接加了一層水。水層會降低視野的亮度和顯微鏡的分辨率，造成菌體和網格線不清晰.

32.血球計數闆計數的誤差主要來自那些方面?如何減少誤差?

答:誤差主要來自試劑誤差、方法誤差、儀器誤差；減少誤差有保持樣品的純淨、細胞溶液必須震蕩均勻、樣品濃度要适中、血球計數闆整潔清晰。

33.菌種保藏中，石蠟油的作用是什麼?

答:作用是密封，防止空氣進入，降低菌種的生理活性。

34.經常使用的細菌菌株，使用哪種保藏方法比較好?

答:用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養基中加入15%的甘油，然後低溫冷凍（-7度)左右。

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