革蘭染色成敗的關鍵在于脫色時間。革蘭氏染色四大基本步驟:結晶紫初染、碘液媒染、乙醇脫色、沙黃複染,其中乙醇脫色是關鍵。因為如果脫色過度,有可能會使革蘭氏陽性菌呈假陰性,如果脫色不夠,有可能使革蘭氏陰性菌呈假陽性。
革蘭氏染色是細菌學中廣泛使用的一種鑒别染色法,通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁内形成了不溶于水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密,革蘭氏染色屬複染法,即将标本固定後,先用龍膽紫染色,加碘液媒染後用酒精脫色,再用蕃紅複染
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