梅塞施密特Bf110（也被稱為Me110）在1939年二戰爆發時，與系出同門的Bf109同為德國空軍一線主力戰鬥機。該機在戰争初期的波蘭、挪威、丹麥、西歐等諸多戰役中表現出色，充分發揮出多用途戰機的優勢，無論在空戰還是對地攻擊方面都取得了很大戰果。特别是1939年12月18日德意志灣空戰中，被擊落的12架英國轟炸機有9架毀于第76驅逐機聯隊的Bf110之手，更加堅定了戈林對驅逐機部隊的信心。然而，在1940年夏季的不列颠之戰中，Bf110卻遭到了噩夢般的損失，事實證明雙發重型戰鬥機在與單發輕型戰鬥機的格鬥中難有勝算，大量的Bf110成為英軍“飓風”、“噴火”戰鬥機的獵物，特别是在8月15日，總計有28架Bf110被擊落，包括第76驅逐機聯隊的兩位大隊長。當不列颠戰役開始時，德國空軍投入了237架Bf110，結果損失223架，損失率高達94%！

盡管在不列颠戰役中蒙受重創，但Bf110在1941年至1942年的巴爾幹、北非、中東以及東線戰場上仍然十分活躍。在“巴巴羅薩”行動的第一天，驅逐機部隊就宣稱取得了51次空戰勝利，而在對地攻擊行動中，Bf110更是得心應手，摧毀了大量地面目标。例如來自第26驅逐機聯隊的約翰内斯·基爾中尉（Johannes Kiel）宣稱取得了20次空戰勝利，并在地面擊毀了62架飛機、9輛坦克和20門火炮，此外還有1艘潛艇和3艘摩托快艇，并因此獲得了騎士十字勳章。不過，在密集的防空炮火面前，Bf110還是顯得相當脆弱，損失較大，而且隻有在己方掌握制空權的情況下才能有效戰鬥。在1942年以後，大部分Bf110都被撤回德國，參與到本土防空戰中。

在1943年初，随着美軍開始展開大規模晝間轟炸行動，Bf110也被投入迎戰盟軍“空中堡壘”的戰鬥中，其中很多來自夜戰部隊。理論上說，Bf110憑借強勁的火力能夠給重型轟炸機構成嚴重威脅，但實際上面對B-17的密集編隊和兇狠的防禦火力，欠缺敏捷的Bf110很難取得戰果，反而損失很大，最多隻能追擊那些掉隊的單架轟炸機，在盟軍護航戰鬥機登場後，Bf110更加難以招架，在1944年初退出了晝間防空戰鬥。

不過，Bf110作為夜間戰鬥機卻非常成功，它早在1940年時就開始扮演這一角色，寬敞的座艙和較大的内部空間很方便加裝夜航設備、武備和增加一名機組成員。在1942年英軍擴大夜間轟炸規模後，Bf110的夜戰任務就變得十分繁重，配備機載雷達和斜射武器的專用夜戰型Bf110也被開發出來，成為德國空軍夜戰部隊的核心力量，僅在1943年中就有2750架英軍轟炸機被Bf110擊落。雖然德國空軍也裝備Do17、Ju88、He219等夜戰型号，但沒有任何一種飛機的成就能夠和Bf110相比，直到戰争結束它都是盟軍夜航轟炸機最可怕的敵人。

在戰争中，使用Bf110的部隊中産生了不少王牌。在晝間驅逐機部隊中擊落敵機20架以上的飛行員有15人，其中戰績最高的是第26驅逐機聯隊的愛德華·特拉特少校（Eduard Tratt），總共取得了38次空戰勝利，其中包括4架B-17和5架P-38，此外還在地面擊毀24輛坦克和26架飛機。在夜戰部隊中自然是頭号王牌施瑙費爾，戰績121架，全部在Bf110上取得。不過，最有名的Bf110飛行員卻是國社黨副元首魯道夫·赫斯（Rudolf Hess），他在1941年5月10日駕駛一架Bf110獨自飛往英國“尋求和平”，留下了一個難解之謎。

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