1.固體菌種生産：

固體菌種是菌絲體生長在固體培養基中而形成的固體形态菌種。 試管母種（1級種） 菌種通常被分為3級。1級種也叫母種或試管種，可用組織分離法或孢子分離法獲得母種。2級種也叫原種，是利用母種的菌絲體接入木屑培養基中所産生的菌種。3級種也叫栽培種，是利用原種再擴繁一次所産生的菌種，它直接用于生産，因此也叫生産種。 經過母種—原種—栽培種的不斷擴大繁殖後，菌絲體的數量越來越多，越來越強壯，利用這樣的菌絲體投入生産就可以生長出優良的子實體。

母種培養基的配制：

（1）常用配方：馬鈴薯200克、白糖20克、瓊脂20克、水1000毫升。為了強化營養，有條件的生産者可在上述培養基中添加蛋白胨3.0克、磷酸二氫鉀3.0克、硫酸鎂1.5克。

（2）配制方法：首先把馬鈴薯削皮、切片、水煮，八分熟後取其汁液，再将汁液小火加熱，放入瓊脂、白糖。溶化後把培養基裝入規格為18毫米×180毫米的試管中，裝入高度為管長的1/4或1/5為适宜。分裝後試管塞緊棉塞，每7支捆成1捆，用牛皮紙包紮，準備滅菌。

（3）培養基滅菌：用手提式高壓蒸汽滅菌鍋或家用高壓鍋滅菌，在0.12兆帕壓力下（鍋内溫度121℃）滅菌40分鐘。待溫度降至60℃時取出擺斜面，斜面長度最好占管長的2/3左右比較合适。

2.菌種分離與擴大培養：

菌種分離方法有孢子分離法、組織分離法、耳木分離法。孢子分離法是選用當年生無雜菌污染的鮮耳片，以黑、厚、大為佳，經無菌水沖洗幾次，用絲線将耳片腹面向下吊挂，另一端吊挂在裝有培養基的三角瓶口部，加棉塞封口，在25～28℃溫箱中接收孢子并培養成菌絲體。組織分離法是選用優質耳片，表面用75%酒精棉球擦拭2～3遍，用酒精棉包住耳片約2分鐘，剪取遠離耳基沒有筋的部位約0.2平方厘米。在無菌條件下，接入試管斜面培養基上，經28℃左右的溫度培養長出菌絲體。

耳木分離法是從黑木耳的段木中分離菌絲體獲得菌種的方法。切取火柴頭大小的木塊，經過消毒，在無菌條件下接入試管斜面，經25～28℃的培養就能長出菌絲體。在菌種分離時，要在接種箱中或接種室超淨工作台上進行無菌操作，防止雜菌污染。分離幾天後在試管斜面上就會長出白色的絨毛狀黑木耳菌絲。經過10天左右的培養，菌絲可長滿斜面，這就是母種。分離成功的試管母種，還可以在試管斜面培養基上擴大繁殖1～3次，這個過程稱為轉管或擴管，也叫傳代。一般1支母種可轉30～40支母種，從而滿足生産上的需要。

3.原種與栽培種生産：原種及栽培種的培養基是通用的，其種類很多，下面僅介紹常用的木屑培養基：

（1）培養基配方：培養基常用配方為闊葉樹木屑78%，麥麸或米糠20%，蔗糖1%，石膏1%（簡稱782011）。

（2）配制方法：先把木屑過篩，将木屑、麥麸或米糠、石膏混合均勻，再用熔化的糖水拌料，使培養料的含水量達到60%左右。測定方法是用手緊握培養料，指縫間稍有水印而不成滴。

（3）培養基裝瓶與裝袋：一般用瓶子生産原種。培養基配好後，即可裝入制種瓶中，裝至瓶肩，料面壓平。培養料在瓶中要求上緊下松，中間用木錐紮1個孔。瓶口内外要擦淨，廣口瓶用丙烯膜或乙烯膜及膠圈封口（丙烯膜适合高壓蒸汽滅菌，乙烯膜适合常壓蒸汽滅菌），小口瓶用棉塞封口。 一般用塑料袋生産栽培種，聚乙烯袋适合常壓蒸汽滅菌，聚丙烯袋适合高壓蒸汽滅菌。袋的大小以33厘米×17厘米×0.005厘米較為适合。裝袋時要保證松緊适當，裝袋後套上套環，插入接種棒，用棉塞塞緊或封專用塑料蓋。裝袋時對料袋要輕拿輕放，防止沙粒或雜物将袋刺破引起污染。

（4）培養基滅菌：原種及栽培種培養基裝瓶裝袋後再裝入鐵筐或塑料筐内準備滅菌。滅菌方法有常壓蒸汽滅菌和高壓蒸汽滅菌兩種。采用常壓蒸汽滅菌時，鍋内溫度達到100℃後要保持8小時以上。采用高壓蒸汽滅菌時，鍋内在0.15兆帕壓力下（鍋内溫度127℃）滅菌1.5小時。 常壓蒸汽滅菌鍋可自行修建，高壓蒸汽滅菌鍋或滅菌櫃一定要從正規廠家購買，以保證安全生産。

4.接種與培養：

（1）接種：經過滅菌後的瓶或袋，待料溫降到30℃以下後，搬入接種箱、接種帳或接種室進行接種。接種前，将接種器具、物品搬入接種場所。這些器具和物品主要有接種匙、鑷子、酒精燈、酒精棉球、菌種、待接種的料袋。物品放好後，再用氣霧消毒劑進行熏蒸消毒，40分鐘後方可使用。 原種是由母種擴接到原種培養基上而得到的菌種，栽培種是由原種擴接到栽培種培養基上而得到的菌種。用原種接栽培種時首先要先拔出料袋内的接種棒再進行接種。

（2）培養：培養場所在使用前也要用氣霧消毒劑進行熏蒸消毒。溫度控制在25～28℃，空間适宜的相對濕度為60%左右，要暗光養菌并經常通風換氣，培養過程中要經常檢查有無雜菌污染。菌種長好後放在低溫、幹燥、清潔處避光保藏，準備使用。另外，栽培種不宜再做菌種擴大繁殖。

5.無菌接種操作程序：首先将接種箱、接種室收拾幹淨，放入培養基、菌種、接種用具。用氣霧消毒粉進行熏蒸消毒，每立方米空間用量1包（5克），置于容器中點燃，保持40分鐘以上。用75%酒精棉擦抹雙手。點燃酒精燈，接種工具灼燒滅菌後開始接種。接種時一定要保持無菌操作，培養基接種後移到培養室進行培養。

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